[发明专利]一种树状分子修饰的透明质酸-多烯紫杉醇偶联物及其制备方法

说明书

本发明提供了一种树状分子修饰的透明质酸‑多烯紫杉醇偶联物，该偶联物为负载多烯紫杉醇和树状大分子的透明质酸，设计合成了具有CD44靶向性的基于透明质酸的纳米粒子递送载体，有效提高了多烯紫杉醇对三阴性乳腺癌的治疗效果。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种树状分子修饰的透明质酸-多烯紫杉醇偶联物。

背景技术

三阴性乳腺癌(TNBC)是一种具有高侵袭性、高转移性的全身性疾病。化疗作为一种长期治疗原发性和转移性肿瘤的标准治疗方法，有望在TNBC治疗中取得更好的治疗效果。具有主动靶向功能的纳米颗粒已成为研究热点，通过利用肿瘤微环境或是肿瘤细胞的特异性，来实现药物向肿瘤部位的特异性递送，从而达到局部化高效治疗效果，并提高药物生物安全性。

细胞表面的跨膜蛋白CD44与肿瘤的发生发展密切相关，并且在许多TNBC细胞中处于高度表达状态，与TNBC的高侵袭性和高转移性密切相关。透明质酸(HA)是一种具有良好生物相容性和生物降解性的天然阴离子糖胺聚糖。HA已被广泛用作抗肿瘤治疗的药物传递载体，更重要的是HA可以特异性靶向CD44受体。

紫杉烷类是TNBC患者的一线化疗药物，其中多西紫杉醇(DTX)是紫杉烷家族的成员之一，它促进微管蛋白组装成微管并抑制其解聚，将细胞阻滞在G2/M期，从而诱导肿瘤细胞有丝分裂灾难。尽管DTX展示了一个令人鼓舞的抗肿瘤功效，但是它同其他小分子化疗药物一样存在着局限性，如水溶性差，缺乏靶向性，体内滞留时间短，高毒副作用。

发明内容

本发明为了解决多烯紫杉醇在肿瘤化疗中存在的上述问题，提供了一种树状分子修饰的透明质酸-多烯紫杉醇偶联物，设计合成了具有CD44靶向性的基于透明质酸的纳米粒子递送载体，有效提高了多烯紫杉醇对三阴性乳腺癌的治疗效果。

为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：

一种树状分子修饰的透明质酸-多烯紫杉醇偶联物，该偶联物为负载多烯紫杉醇和树状大分子的透明质酸，结构如下：

其中，n选自0、1、2、3、4、5……。

本发明的透明质酸-多烯紫杉醇偶联物的颗粒粒径为118-126nm，优点是该粒径有利于纳米粒子在肿瘤组织中的富集和渗透。

本发明所述透明质酸的分子量为48000Da，该分子量的透明质酸对CD44表达阳性的肿瘤细胞有良好的靶向性。

本发明还提供了树状分子修饰的透明质酸-多烯紫杉醇偶联物的制备方法：在作为载体的透明质酸上引入氨基乙硫醇，得到HA-SH，备用；将马来酰亚胺修饰的GFLG与多烯紫杉醇偶联，得到偶联物Mal-GFLG-DTX，再通过巯基-烯点击反应将Mal-GFLG-DTX连接到HA-SH上，得到偶联物中间体；再将糖化后的树状分子Dendron-8Glu通过巯基交换反应与透明质酸上的巯基连接，得成品。

优选地，所述偶联物Mal-GFLG-DTX的制备方法：取Mal-GFLG-OH和DTX并置于反应瓶，氮气保护下，加入溶剂，冰水浴冷却，避免高温发生副反应，向反应液中加入缩合剂和催化剂，发生缩合反应，得到偶联物Mal-GFLG-DTX。

由于药物DTX的分子结构大，参与反应的醇羟基属于仲醇，缩合时受空间位阻影响，反应活性较低，经实验研究表明，常规的缩合剂难以得到目标产物。

进一步优选地，所述溶剂为超干二氯甲烷。该溶剂沸点低，易于除去，且对原料溶解性好。其它溶剂如DMF、DMSO等难以除去，醇类溶剂会参与反应，醚类溶剂对原料溶解性不好。

因选用二氯甲烷作为溶剂，二氯甲烷沸点低，在反应装置抽真空，置换氮气的过程中会被抽走，且不利于反应装置达到高的真空环境，故先加入固体原料，抽真空置换氮气后，再加入低沸点的溶剂。