[发明专利]鉴定马铃薯黑胫病菌的方法及其引物和探针在审
| 申请号： | 202110388415.0 | 申请日： | 2021-04-12 |
| 公开（公告）号： | CN112961927A | 公开（公告）日： | 2021-06-15 |
| 发明（设计）人： | 杨秋夏;钱俊婷;易建平 | 申请（专利权）人： | 上海海关动植物与食品检验检疫技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/06;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅 |
| 地址： | 200135 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 鉴定 马铃薯 病菌 方法 及其 引物 探针 | ||
1.马铃薯黑胫病菌的特异性引物对，其特征在于，所述引物对由引物Ds4和引物Ds5组成；所述引物Ds4为SEQ ID No.1所示的单链DNA分子；所述引物Ds5为SEQ ID No.2所示的单链DNA分子。
2.鉴定或辅助鉴定马铃薯黑胫病菌的组合物，其特征在于，所述组合物由权利要求1所述的特异性引物对和马铃薯黑胫病菌特异性探针组成，所述马铃薯黑胫病菌特异性探针为P-Dsol，所述P-Dsol的核苷酸序列为SEQ ID No.3。
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述P-Dsol为TaqMan-MGB探针。
4.鉴定或辅助鉴定马铃薯黑胫病菌的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
A1)提取待测样品基因组DNA；
A2)以所述基因组DNA为模板，用权利要求2所述的组合物进行实时荧光PCR反应；根据实时荧光PCR的扩增曲线确定待测样品是否含有马铃薯黑胫病菌或对待测样品中的马铃薯黑胫病菌进行定量检测。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，根据实时荧光PCR的扩增曲线确定待测样品是否含有马铃薯黑胫病菌的方法为：如果实时荧光PCR的扩增曲线为S型曲线确定待测样品中含有马铃薯黑胫病菌或为马铃薯黑胫病菌；如果实时荧光PCR的扩增曲线不为S型曲线，确定待测样品中不含有马铃薯黑胫病菌或不为马铃薯黑胫病菌。
6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于，步骤A2)所述实时荧光PCR反应程序为95℃预变性10s；95℃变性15s，60℃退火1min，40个循环。
7.鉴定或辅助鉴定马铃薯黑胫病菌的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
A1)提取待测样品基因组DNA；
A2)以所述基因组DNA为模板，用权利要求1所述的引物对进行PCR扩增得到PCR产物，检测所述PCR产物的大小，如果所述PCR产物含有一个491bp的DNA片段，所述待测样品中含有马铃薯黑胫病菌或所述待测样品为马铃薯黑胫病菌；如果所述PCR产物不含有491bp的DNA片段，所述待测样品中不含有马铃薯黑胫病菌或所述待测样品不为马铃薯黑胫病菌。
8.权利要求1所述的特异性引物对或权利要求2或3所述的组合物在鉴定或辅助鉴定马铃薯黑胫病菌中的应用或在制备鉴定或辅助鉴定马铃薯黑胫病菌的产品中的应用。
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