[发明专利]扩增培养基及其在NK细胞培养中的应用

说明书

本发明涉及细胞培养技术领域，具体而言，涉及一种扩增培养基及其在NK细胞培养中的应用。该培养基包括无血清培养基KBM 581以及添加于其中的添加剂；所述添加剂包括：聚乙烯吡咯烷酮5mg/mL～0mg/mL；黄芪多糖10mg/mL～40mg/mL；IL‑2 50U/mL～500U/mL；IL‑12 10U/mL～100U/mL；IL‑15 10U/mL～80U/mL；以及CD16单抗1μg/mL～6μg/mL。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，具体而言，涉及一种扩增培养基及其在NK细胞培养中的应用。

背景技术

免疫治疗在21世纪随着生命科学的发展蓬勃兴起，是现代生物医药的产业中发展最快的领域之一。NK细胞(自然杀伤细胞)是一种重要的免疫细胞，分布于外周血、脾脏、淋巴等组织。NK细胞在体内可以清除感染细胞、肿瘤细胞等异常细胞，切与其他免疫细胞不同，NK细胞不需要依靠免疫系统指令或其他细胞配合，自己即可识别、攻击异常细胞。但自然条件下NK细胞仅占外周血淋巴细胞的5％～15％，含量较低，在免疫治疗的临床使用上需要一种稳定的体外扩增技术，包括特定的培养基以及培养方法。

现有的NK细胞培养基多为基础细胞培养基添加细胞因子后在培养瓶中静置培养，受限于培养瓶培养方式导致细胞扩增数量少，效率低。也有使用生物反应器扩增NK细胞的尝试，但由于对细胞剪切力的应对方法不足，导致NK细胞容易受到搅拌桨叶和气泡破裂产生的细胞剪切力的伤害导致细胞死亡，影响培养效率和培养环境。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明主要解决现有的NK细胞体外扩增效率较低的问题，提供一种扩增培养基，以及使用该培养基有效于生物反应器高效体外扩增NK细胞的方法。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

根据本发明的第一方面，本发明涉及一种扩增培养基，其包括无血清培养基KBM581以及添加于其中的添加剂；

所述添加剂包括：

聚乙烯吡咯烷酮(polyvinyl pyrrolidone，PVP) 5mg/mL～10mg/mL；

黄芪多糖 10mg/mL～40mg/mL；

IL-2 50U/mL～500U/mL；

IL-12 10U/mL～100U/mL；

IL-15 10U/mL～80U/mL；以及

CD16单抗 1μg/mL～6μg/mL。

可选的，如上所述的扩增培养基，所述添加剂包括：

聚乙烯吡咯烷酮 6mg/mL～9mg/mL；

黄芪多糖 20mg/mL～30mg/mL；

IL-2 150U/mL～400U/mL；

IL-12 30U/mL～80U/mL；

IL-15 20U/mL～70U/mL；以及

CD16单抗 2μg/mL～5μg/mL。

可选的，如上所述的扩增培养基，所述添加剂包括：

聚乙烯吡咯烷酮 7mg/mL～8mg/mL；

黄芪多糖 22mg/mL～28mg/mL；

IL-2 200U/mL～350U/mL；

IL-12 40U/mL～70U/mL；

IL-15 30U/mL～60U/mL；以及