[发明专利]扩增培养基及其在NK细胞培养中的应用

权利要求书

1.扩增培养基，其特征在于，包括无血清培养基KBM 581以及添加于其中的添加剂；

所述添加剂包括：

聚乙烯吡咯烷酮 5mg/mL～10mg/mL；

黄芪多糖 10mg/mL～40mg/mL；

IL-2 50U/mL～500U/mL；

IL-12 10U/mL～100U/mL；

IL-15 10U/mL～80U/mL；以及

CD16单抗 1μg/mL～6μg/mL。

2.根据权利要求1所述的扩增培养基，其特征在于，所述添加剂包括：

聚乙烯吡咯烷酮 6mg/mL～9mg/mL；

黄芪多糖 20mg/mL～30mg/mL；

IL-2 150U/mL～400U/mL；

IL-12 30U/mL～80U/mL；

IL-15 20U/mL～70U/mL；以及

CD16单抗 2μg/mL～5μg/mL。

3.根据权利要求2所述的扩增培养基，其特征在于，所述添加剂包括：

聚乙烯吡咯烷酮 7mg/mL～8mg/mL；

黄芪多糖 22mg/mL～28mg/mL；

IL-2 200U/mL～350U/mL；

IL-12 40U/mL～70U/mL；

IL-15 30U/mL～60U/mL；以及

CD16单抗 2μg/mL～5μg/mL。

4.根据权利要求1～3任一项所述的扩增培养基，其特征在于，所述聚乙烯吡咯烷酮的平均分子量为250000～350000。

5.组合产品，其特征在于，包含：

第一预培养培养基、第二预培养培养基、CD16单抗，以及权利要求1～4任一项所述的扩增培养基；

其中所述第一预培养培养基为所述扩增培养基去除聚乙烯吡咯烷酮和CD16单抗后得到；

其中所述第二预培养培养基为所述扩增培养基去除聚乙烯吡咯烷酮后得到。

6.NK细胞培养方法，其特征在于，包括：

a)将外周血单个核细胞接种于预先包被有CD16单抗的培养瓶中，所用培养基为权利要求5中所述的第一预培养培养基，培养至第2～4天；

b)将培养基更换为所用培养基为权利要求5中所述的第二预培养培养基，，进行一次多次扩大培养；

c)将培养所得的细胞移入生物反应器中，利用权利要求1～4任一项所述的扩增培养基进行放大培养。

7.根据权利要求6所述的NK细胞培养方法，其特征在于，在步骤a)中，所述CD16单抗以1μg/mL～6μg/mL浓度的包被液进行包被。

8.根据权利要求6所述的培养方法，其特征在于，在步骤a)中，所述外周血单个核细胞的接种量为(1～3)×10⁶个/mL。

9.根据权利要求6所述的培养方法，其特征在于，在步骤c)中，细胞移入生物反应器后的培养条件为：

溶氧量43％～47％，搅拌速度40rpm～60rpm。

10.根据权利要求6所述的培养方法，其特征在于，步骤c)还包括：

通过添加所述扩增培养基以控制反应器中的细胞密度不超过1×10⁷个/mL。