[发明专利]一种柱后衍生-液相色谱检测尿素的方法

说明书

本发明提供了一种柱后衍生‑液相色谱检测尿素的方法，属于检测技术领域。该方法包括以下步骤：(1)取待测水样，注入液相色谱柱进行分离；(2)液相色谱分离后的流动相进入衍生池，与衍生化试剂进行反应；(3)经过衍生化的流动相流入荧光检测器进行荧光检测，得到待测水样中尿素含量。该方法采用柱后衍生液相色谱检测方式，将尿素在色谱柱中实现分离后，在衍生池内与衍生化试剂反应，具有灵敏度高、检出限低、抗干扰能力强的优点。

技术领域

本发明属于化学分析领域，具体涉及一种柱后衍生-液相色谱检测尿素的方法。

背景技术

人体代谢分解蛋白质过程中产生的尿素，会随着尿液、汗液排出体外，而人在游泳时这些排出体外的尿素，会对水体造成污染，尿素浓度超标时甚至会引发多种疾病，更有可能对皮肤黏膜造成损伤。游泳池水中尿素含量作为公共卫生监测的一项重要指标，它反映了游泳池水受污染的情况，根据国家市场监督管理总局制定的GB 37488-2019公共场所卫生指标及限值要求，游泳池水中尿素质量浓度必须小于3.5mg/L。因此，检测水中尿素是十分必要的。

目前，水中尿素含量的检测方法有分光光度比色法、流动注射分光光度法、脲酶-谷氨酸脱氢酶偶联速率测定法、柱前衍生-液相色谱荧光检测法，然而这些方法各自存在前处理时间长，水浴加热显色稳定性较差，线性不好，线性范围较窄、柱前衍生副产物分离困难、柱前衍生化过程易引入杂质等缺点。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足之处，提供一种柱后衍生-液相色谱检测尿素的方法。本发明的柱后衍生-液相色谱检测尿素的方法，采用柱后衍生，具有灵敏度高、检出限低、抗干扰能力强的优点。

为了达到上述目的，采用了一种柱后衍生-液相色谱检测尿素的方法，包括以下步骤：

(1)取待测水样，注入液相色谱柱进行分离；

(2)液相色谱分离后的流动相进入衍生池，与衍生化试剂进行反应；

(3)经过衍生化的流动相流入荧光检测器进行荧光检测，得到待测水样中尿素含量。

上述柱后衍生-液相色谱检测尿素的方法，将尿素在色谱柱中实现分离后，在衍生池内与衍生化试剂反应，检测的是衍生产物。由于其重现性好，影响因素少，引入物质比较少，从而具有灵敏度高、检出限低、抗干扰能力强的优点。

在其中一个实施例中，所述色谱柱采用HSS T3色谱柱。尿素作为强极性化合物，常规的通用型反相C₁₈柱只适合分析非极性或中性化合物，对强极性化合物不保留，与水相兼容性不好，本发明人经反复筛选比较后选择HSS T3色谱柱对尿素进行分离，HSS T3色谱柱对极性分子的反相保留能力较强，对尿素在柱上的保留具有较好效果。

在其中一个实施例中，所述色谱柱规格为150mm×4.6mm，填料粒径为5μm。

在其中一个实施例中，所述衍生化试剂为0.5±0.2g/L的呫吨氢醇甲醇水溶液，其中含有体积百分浓度为0.5±0.2％的盐酸。

可以理解的，上述体积百分浓度为以浓盐酸(12mol/L)为浓度100％计，即体积百分浓度为0.5％的盐酸表示100mL溶液中有0.5mL浓盐酸。

常规技术中，尿素柱后衍生化试剂常选用尿酶和碘，通过多步反应来测定，但操作繁琐，采用呫吨氢醇作为衍生化试剂能简化测定步骤。

在其中一个实施例中，所述衍生化试剂中甲醇和水的体积比为3±0.5:1。呫吨氢醇难溶于水，易溶于醇，容易引起系统压力超压，极大的限制了其在柱后衍生中的应用。本发明通过采用甲醇和水的混合溶剂配制呫吨氢醇衍生化试剂，并反复尝试调整有机相和水相比例，成功解决难溶于水带来的系统压力超压问题，使得呫吨氢醇可用于柱后衍生检测中。