[发明专利]一种中枢神经特异性蛋白的冻干方法

权利要求书

1.一种中枢神经特异性蛋白的冻干方法，包括以下步骤：取缓冲液将S100-β溶解，制成S100-β试剂，放入真空冷冻干燥机内进行冻干；将真空冷冻干燥机设置成三个阶段，分别为预冷冻段、升华干燥段、解析干燥段；冻干后，在4-8℃环境下保存；

所述预冷冻段为：将S100-β试剂从常温降温至0℃；降温时间为5-30分钟；

在0℃保温2-10分钟后，再降温至-30℃，降温时间为5-30分钟；

在-30℃保温5-60分钟后，再降温至-55℃，降温时间为5-30分钟；在-55℃保温30-240分钟；

所述解析干燥段为：设置两个温度点，分别为20℃、25℃；

-5℃到20℃的升温时间为30-120分钟、在20℃的保温时间为10-60分钟；

20℃到25℃的升温时间为5-15分钟、在25℃的保温时间为120-620分钟；

其中，所述缓冲液由如下组分制成：HEPES、氯化钠、氯化钾、硫酸镁、BSA、海藻糖、甘氨酸、Casein、甘油、纯化水；

按照重量份数计，所述缓冲液包括如下组分：HEPES 1.0-10 份、氯化钠5-10 份、氯化钾 0.5-5 份、硫酸镁0.1-10 份、BSA 4.0-30 份、海藻糖10-100 份、甘氨酸4.0-20份、Casein 0.5-25 份、甘油20-200 份；

所述缓冲液的pH值在6.5-8.2之间。

2.如权利要求1所述的冻干方法，其特征在于，所述升华干燥段为：将真空度在1-5分钟内降至0-5帕斯卡（pa）；设置7个温度点，分别为-50℃、-45℃、-35℃、-30℃、-25℃、-25℃、-5℃；-55℃到-50℃的升温时间为2-10分钟、在-50℃的保温时间为10-60分钟；

-50℃到-45℃的升温时间为10-60分钟、在-45℃的保温时间为30-120分钟；

-45℃到-35℃的升温时间为10-60分钟、在-35℃的保温时间为30-240分钟；

-35℃到-30℃的升温时间为2-60分钟、在-30℃的保温时间为30-480分钟；

-30℃到-25℃的升温时间为2-60分钟、在-25℃的保温时间为30-240分钟；

-25℃到-15℃的升温时间为5-60分钟、在-15℃的保温时间为30-120分钟；

-15℃到-5℃的升温时间为5-30分钟、在-5℃的保温时间为10-60分钟。

3.如权利要求1所述的冻干方法，其特征在于，按照重量份数计，所述缓冲液包括如下组分：HEPES 3.0-10 份、氯化钠9 份、氯化钾 0.5-5 份、硫酸镁0.1-10 份、BSA 4.0-27份、海藻糖10-100 份、甘氨酸4.0-18 份、Casein 0.5-25 份、甘油20-200 份。

4.如权利要求1所述的冻干方法，其特征在于，所述缓冲液的制备方法，包括以下步骤：

（1）称取HEPES、NaCl、KCl、MgSO₄、海藻糖、牛血清白蛋白、甘氨酸、酪蛋白、甘油依次加入到纯化水中搅拌至完全溶解，调节pH值，并定容至1000ml；

（2）使用滤膜进行过滤，即得缓冲液。

5.如权利要求4所述的冻干方法，其特征在于，所述滤膜孔径为0.22μm。