[发明专利]一种实时快速检测大肠杆菌紫外照射效果的方法

权利要求书

1.一种实时快速检测大肠杆菌紫外照射效果的方法，其特征在于，通过双通道探针法荧光定量PCR技术检测大肠杆菌的紫外照射效果，所述荧光定量PCR技术包含若干实验组；所述荧光定量PCR技术包含PCR扩增和荧光定量测量两部分；所述实验组包含短片段引物对P1，经所述PCR扩增后，由所述荧光定量测量得CT短；所述实验组包含长片段引物对P2，经所述PCR扩增后，由所述荧光定量测量得CT长；

在不同紫外照射条件下处理所述若干实验组的大肠杆菌样品，所述实验组的ΔCT=CT长-CT短；所述ΔCT与所述大肠杆菌样品杀灭对数值K存在如下关系，K=2.156×ΔCT-2.164；

所述紫外照射条件包含不同的照射时间及照射强度；所述ΔCT为荧光信号CT差值；包括大肠杆菌ATCC 25922的引物和探针序列如下，

第一探针序列，5`HEX-CAGCGCCGAGGTGAGATTGTCCAACAGT-3`BHQ1；

第二探针序列，5`6-FAM-TAGCTGTACCACGCGCCTGCTTTC-3`BHQ1；

短片段引物对序列P1，5'- AGAGAGATATTGACCCCTTTG -3'，

5'- ACCTGCATCGTGCCAGTATG -3'；

长片段引物对序列P2，5'-CTTCTCGATCTCTTTCGCGGTTTC -3'，

5'-AACCGTAACAACTGCTGAGTCTTG-3'。

2.一种实时快速检测大肠杆菌紫外照射效果的方法，其特征在于，通过双通道探针法荧光定量PCR技术检测大肠杆菌的紫外照射效果，所述荧光定量PCR技术包含若干实验组；所述荧光定量PCR技术包含PCR扩增和荧光定量测量两部分；所述实验组包含短片段引物对P1，经所述PCR扩增后，由所述荧光定量测量得CT短；所述实验组包含长片段引物对P2，经所述PCR扩增后，由所述荧光定量测量得CT长；

在不同紫外照射条件下处理所述若干实验组的大肠杆菌样品，所述实验组的ΔCT=CT长-CT短；所述ΔCT与所述大肠杆菌样品杀灭对数值K存在如下关系，K=2.156×ΔCT-2.164；

所述紫外照射条件包含不同的照射时间及照射强度；所述ΔCT为荧光信号CT差值；包括大肠杆菌K12的引物和探针序列如下，

第一探针序列，5`6-FAM-CTGCTCACCGACAAAGCTGATCTCT-3`BHQ1；

第二探针序列，5`VIC-CCTGAAAGCCCAACAGGAAATAACCTCG-3`BHQ1；

短片段引物对序列P1，5'-GCATTATCCAGCACGTTG -3'，

5'- GCAAAGGGGTCAATATCTCTC -3'；

长片段引物对序列P2，5'- ATGTACTTGCTCAGCCGTC -3'，

5'- ACCTGATGTACGTAATAAACCGT -3'。