[发明专利]基于关键指标提高准确性的单细胞测序方法有效
| 申请号： | 202110378925.X | 申请日： | 2021-04-08 |
| 公开（公告）号： | CN113151425B | 公开（公告）日： | 2023-01-06 |
| 发明（设计）人： | 王晶;张永卓;傅博强;高运华 | 申请（专利权）人： | 中国计量科学研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 北京商专永信知识产权代理事务所(普通合伙) 11400 | 代理人： | 欧阳石文 |
| 地址： | 100029 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 关键 指标 提高 准确性 单细胞 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种基于关键指标提高准确性的单细胞测序方法，其中测序平台是10XGenomics，或BD Rhapsody平台，其特征在于，单细胞测序的样本满足下述标准：细胞活性80％，细胞浓度700-1200cells/uL，细胞直径5-40um；
单细胞测序上机样本满足下述要求：cDNA产量大于150ng；片段长度范围200bp～9000bp；主峰值在1000-2000之间；cDNA浓度1～60ng/ul；
测序文库达到下述要求：片段大小位于400-500bp；文库峰位于250bp-1500bp之间；Qubit浓度＝4ng/ul；
所述单细胞测序是指采用Illumina Hiseq PE150或NovaSeq PE150测序策略，每个细胞测50,000-100,000条reads，或每个细胞测15-30M数据量；
所述单细胞是细胞系A549或NIH3T3。
2.如权利要求1所述的基于关键指标提高准确性的单细胞测序方法，其特征在于，其是采用AOPI荧光染色法检测样本的细胞数量和活细胞数量。
3.如权利要求1所述的基于关键指标提高准确性的单细胞测序方法，其特征在于，采用Smart-seq2法扩增制备单个细胞样本，用于单细胞测序。
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