[发明专利]一种固液结合制备普卡那肽的方法

说明书

本发明公开了一种固液结合制备普卡那肽的方法，首次采用Fmoc‑Cys(Trt)‑OH、Fmoc‑Cys(Mmt)‑OH、Fmoc‑Cys(tButhio)–OH组合来合成普卡那肽，在4位半胱氨酸侧链巯基采用tButhio保护，12位半胱氨酸侧链巯基采用Mmt保护，7位和15位半胱氨酸侧链巯基采用Trt保护；在固相树脂上温和的形成第一对二硫键4‑12；然后经裂解、液相环化形成第二对二硫键7‑15。本发明简化了制备流程，减少了错位配对的可能性，提高了粗肽的纯度，降低了纯化难度。

技术领域

本发明涉及多肽合成领域，特别涉及一种固液结合制备普卡那肽的方法。

背景技术

慢性特发性便秘（CIC）与便秘型肠易激综合征(IBS-C)是2种常见的胃肠道疾病，全球发病率分别为12%～17%和11.2%，女性多于男性。二者都可表现为排便困难，粪便硬、干、小，排便次数减少，以及腹痛、腹胀和腹部不适等症状。慢性特发性便秘以便秘为主，而IBS-C以腹痛、腹胀、腹部不适为主。慢性便秘与IBS-C显著影响患者的生命质量，并给医疗保健系统带来沉重的经济负担。研究表明，每年美国用于评估和治疗慢性便秘的费用超过70亿美元，用于评估和治疗IBS的费用超过200亿美元。当年龄和性别相似时，IBS患者的医疗保健费用比没有IBS者高50%。虽有多种治疗方法，但上述2种疾病治疗效果并不理想。常用的治疗方法包括生活方式干预(如多喝水、锻炼、添加膳食纤维等)和药物治疗(如渗透性泻药、润滑剂、刺激性药物等)。生活方式干预虽然安全，但除了对缺乏膳食纤维患者外，效果并不理想。在新型的治疗药物中，促分泌类药物具有靶点和作用机制明确、特异性高、不良作用小等独特优势。这类药物包括鲁比前列酮(lubiprostone)、利那洛肽(linaclotide)和普卡那肽(plecanatide)等，均可促进肠液分泌，从而增加粪便含水量并增加排便频率。

普卡那肽（Plecanatide）由美国Synergy制药公司研发，美国食品药品管理局(FDA)于2017年1月19日批准上市，商品名为Trulance®。普卡那肽具有促尿钠排泄的鸟苷酸环化酶受体激动药的作用，能调节胃肠道中的酸碱离子，诱导液体转运进入胃肠道，增加胃肠道的蠕动和加速排便，适用于治疗成人慢性特发性便秘。普卡那肽是尿鸟苷蛋白(uroguanylin)的类似物，含有16个氨基酸的环状多肽，其序列为：H-Asn-Asp-Glu-⁴Cys-Glu-Leu-⁷Cys-Val-Asn-Val-Ala-¹²Cys-Thr-Gly-¹⁵Cys-Leu-OH (两对二硫键：⁴Cys-¹²Cys和⁷Cys-¹⁵Cys)。

普卡那肽的合成方法，现有技术中报道的主要有：

专利US10011637采用片段法(6+7+2)合成线性肽H-Asn-Asp-Glu-⁴Cys-Glu-Leu-⁷Cys(Acm)-Val-Asn-Val-Ala-¹²Cys- Thr-Gly-¹⁵Cys(Acm)-Leu-OH，然后经双氧水氧化成环⁷Cys-¹⁵Cys，再经碘/醋酸氧化成环⁴Cys-¹²Cys，得到普卡那肽。该专利的合成方法，主要缺点是经碘/醋酸氧化成环⁴Cys-¹²Cys后处理较复杂，收率较低。采用液相两步氧化的专利还有CN108440652A，也是遇到同样的问题。

CN107383170A采用Fmoc化学固相法合成线性肽，然后一步氧化形成两对二硫键，得到普卡那肽。该专利的合成方法，主要缺点是容易形成二硫键配对错误的杂质，纯化难度较大，总收率较低。CN110903350A通过引入假脯肽、Dmb二肽来固相合成肽树脂，经裂解后一步氧化成两对二硫键,同样也未能解决容易形成二硫键配对错误的难题。