[发明专利]一种检测杀螟硫磷的荧光比率型免疫分析方法

权利要求书

1.一种检测杀螟硫磷的荧光比率型免疫分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.壳聚糖修饰的铂纳米颗粒的合成：将壳聚糖先溶解于醋酸缓冲液中，在搅拌条件下，往壳聚糖溶液中滴加H₂PtCl₆溶液，混合后室温搅拌一定时间，随后加入新制的NaBH₄溶液，继续室温搅拌，获得Ch-Pt NPs，储存备用；

S2.微孔板的包被：将杀螟硫磷包被原加入微孔板中，温育一段时间，随后洗去包被液；将板拍干，加入一定体积封闭液，温育一段时间后，将板拍干，于烘箱中烘干，储存备用；

S3.标准曲线的建立：将不同浓度的杀螟硫磷标准溶液与抗体同时加入步骤S2得到的微孔板中，温育一定时间后，洗板，加入AAP溶液温育，随后加入步骤S1制备的Ch-Pt NPs和OPD溶液，温育，测定在360nm激发下，记录400～650nm范围内的荧光发射光谱，计算荧光强度比值I₄₃₀/I₅₆₈和(I₄₃₀/I₅₆₈)/(I₄₃₀/I₅₆₈)₀，其中，(I₄₃₀/I₅₆₈)₀指杀螟硫磷浓度为0时的荧光强度峰比值，以杀螟硫磷浓度为横坐标，(I₄₃₀/I₅₆₈)/(I₄₃₀/I₅₆₈)₀为纵坐标绘制标准曲线；

S4.样品中杀螟硫磷浓度的测定：将等体积处理好的样品替代杀螟硫磷标准品溶液，按照步骤S3的步骤操作，将测到的(I₄₃₀/I₅₆₈)/(I₄₃₀/I₅₆₈)₀代入所述步骤S3得到的标准曲线，以得到样品中杀螟硫磷浓度；

所述步骤S1中HAc和水的体积比为0.01～0.02：1；

所述步骤S1中壳聚糖和HAc溶液质量体积比为0.001～0.005：1；

所述步骤S1中H₂PtCl₆溶液浓度为1～10mM，H₂PtCl₆与壳聚糖溶液体积比为0.01～0.04：1，搅拌时间20～60min；

所述步骤S1中NaBH₄浓度0.1～0.5M，加入体积比为0.02～0.05：1，搅拌时间为60～120min；

所述步骤S2中杀螟硫磷包被原体积100μL，温育6～8h；

所述步骤S2中封闭液需100～200μL，封闭1～3h；

所述步骤S3中纳米抗体的浓度为0.1～0.4μg L^-1，时间为30～40min；

所述步骤S3中AAP浓度为1～5mM，时间为30～40min；

所述步骤S3中Ch-Pt NPs浓度为1～5mM，OPD浓度为1～5mM；加入Ch-Pt NPs和OPD后，反应时间为10～20min。