[发明专利]一种1-磺酸基-异吲哚半抗原、抗原和抗体及其制备方法与应用

说明书

本发明提供一种1‑磺酸基‑异吲哚半抗原、人工抗原、抗体及其制备与应用。一种1‑磺酸基‑异吲哚半抗原，其结构式如式(Ⅰ)所示：其中，R为—(CH₂)_n—，其中n＝1～6。本发明通过将亚硫酸盐与邻苯二甲醛衍及一定碳链长度的脂肪族氨基酸生反应，在半抗原结构中引入芳香环结构(吲哚环)同时保留了亚硫酸盐的特征结构磺酸基，有利于刺激动物免疫应答产生特异性更强、灵敏度更高的抗体。

技术领域

本发明属于食品安全免疫检测技术领域，更具体地，涉及一种1-磺酸基-异吲哚的半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法与应用。

背景技术

亚硫酸盐是一类很早即在世界范围内广泛使用的食品添加剂，可作为食品漂白剂，防腐剂；可抑制非酶褐变和酶促褐变，防止食品褐变，使水果不至黑变，还能防止鲜虾生成黑斑；在酸性介质中，还是十分有效的抗菌剂。同时，在发酵食品与腐败食品中，亚硫酸盐的含量非常高。

在人体内，亚硫酸离子本来就是含硫氨基酸代谢过程中的产物，因而，机体内存在能使其氧化的亚硫酸氧化酶,亚硫酸氧化酶在肝脏中最多，其他各种器官中也有分布，是人体必不可少的一种酶。进入机体的亚硫酸盐，经亚硫酸氧化酶催化，与氧结合生成无毒害的SO₄^2-。人一天摄入1g亚硫酸盐时不会明显危害，摄入4～6g可造成胃肠障碍，引起剧烈腹泻。慢性中毒，可引起头疼，肾脏障碍，红血球和血红蛋白减少等症状。同时，食品安全国家标准也对亚硫酸盐的残留量做出了要求，GB 2760中指出不同类型食品的亚硫酸盐最大残留限量在0.01～0.4g/kg之间。

目前，亚硫酸盐的监测，主要依赖理化分析方法，如中和滴定法、重量法、浊度法、盐酸副玫瑰苯胺比色法等。这些方法的检出限主要在0.3-3.0mg/kg之间，虽然检测操作较为简单，但是只能满足单个样品检测，费时费力，不适宜大批量的快速筛选，因此，需发明一种针对亚硫酸盐的快速、简便的检测方法。而且，目前尚无可用于免疫检测亚硫酸盐的半抗原、抗原和抗体的相关报道。

发明内容

本发明针对现有的亚硫酸盐检测技术的缺陷与不足，提供了一种亚硫酸盐衍生物—1-磺酸基-异吲哚的半抗原及其相应的人工抗原和抗体及其制备方法。

本发明的另一目的在于提供了所述半抗原、人工抗原和抗体的应用。

本发明的另一目的在于提供一种检测亚硫酸盐的免疫分析方法。

本发明的上述目的是通过以下技术方案予以实现的。

第一方面，一种1-磺酸基-异吲哚半抗原，其特征在于，其结构式如式(Ⅰ)所示：

其中，R为—(CH₂)_n—，其中n＝1～6。

第二发明，一种1-磺酸基-异吲哚半抗原的制备方法，包括如下步骤：将邻苯二甲醛和亚硫酸钠与式(II)所示的氨基酸在室温条件下于弱酸性环境中进行反应后得到1-磺酸基-异吲哚半抗原；其中，

H₂N-R-COOH

式(II)

其中，R为—(CH₂)_n—，其中n＝1～6。

在本发明中，所述1-磺酸基-异吲哚半抗原的制备方法具体包括以下步骤：将邻苯二甲醛溶于无水乙醇，无水亚硫酸钠溶于一级水，式(II)所示的氨基酸溶于一级水，其中邻苯二甲醛：式(II)所示氨基酸：无水亚硫酸钠的摩尔比为1：1：1.2；将三份溶液依次加入到pH＝6.6的磷酸二氢钠-氢氧化钠缓冲溶液中，室温磁力搅拌反应10min，减压蒸馏除去反应液中的乙醇，冷冻干燥，即得1-磺酸基-异吲哚半抗原。

第三方面，一种1-磺酸基-异吲哚人工抗原，其结构式如式(III)所示：