[发明专利]一种1-磺酸基-异吲哚半抗原、抗原和抗体及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种1-磺酸基-异吲哚人工抗原，其特征在于，其结构式如式（III）所示：

式（III）；

其中，R为—（CH₂）_n—，其中n =3；载体蛋白为乳铁蛋白、鸡卵清白蛋白。

2.权利要求1所述的1-磺酸基-异吲哚人工抗原的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：

将1-磺酸基-异吲哚半抗原溶于MES水溶液中，加入EDC和NHS室温避光搅拌，反应结束后转移至冰浴，将载体蛋白溶解后加入，搅拌均匀，室温偶联过夜；偶联混合物低温下PBS透析数天，得到所述1-磺酸基-异吲哚人工抗原；所述半抗原与载体蛋白的摩尔比为 30~300：1；

其中，一种1-磺酸基-异吲哚半抗原，其结构式如式（Ⅰ）所示：

其中，R为—（CH₂）_n—，其中n = 3；载体蛋白为乳铁蛋白、鸡卵清白蛋白。

3.根据权利要求2所述人工抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S11.将载体蛋白溶解于2~10mL的pH=9.6的 CB缓冲液中；

S12.取7~37 mg的1-磺酸基-异吲哚半抗原溶解于0.1M MES水溶液中；

S13.将7~37mg的EDC和5~23mg的NHS加入到S12的半抗原溶解液中，室温避光反应4h形成活泼酯；

S14.将活泼酯滴加到 S11的载体蛋白溶液中，室温避光偶联过夜；

S15.反应完成后，将偶联混合物于4℃下，用PBS透析3天，得到1-磺酸基-异吲哚人工抗原。

4.权利要求1所述1-磺酸基-异吲哚人工抗原在间接检测亚硫酸盐中的应用。

5.一种间接检测亚硫酸盐的免疫分析方法，具体包括如下步骤：

S31.将权利要求1中式（III）所示的1-磺酸基-异吲哚人工抗原免疫动物制备亚硫酸盐的多克隆抗体，其中载体蛋白为乳铁蛋白；

S32.将权利要求1中式（III）所示的1-磺酸基-异吲哚人工抗原作为包被原包被在微孔板上，其中载体蛋白为鸡卵清白蛋白，然后将步骤S31制备得到亚硫酸盐的多克隆抗体加入微孔板中；

S33.加入衍生后的待测样品，采用竞争ELISA间接测定待测样品中亚硫酸盐的含量。