[发明专利]一种多肽中测定N,N-二异丙基碳二亚胺含量的气相分析方法

说明书

本发明涉及分析化学领域，具体涉及一种多肽中测定N,N二异丙基碳二亚胺含量的气相分析方法。本发明的分析方法具有灵敏度高、稳定性好等特点。该方法包括以下步骤：1)取待测多肽样品，加入碱性溶剂使其溶解后，用有机溶剂制备待测样品；2)取待测多肽样品，加入碱性溶剂使其溶解后，再加入用有机溶剂和混合溶剂溶解后的N,N二异丙基碳二亚胺对照品贮备液，以制备待测对照品溶液；3)采用气相色谱法对上述溶液进行检测，4)按标准加入法计算被测样品中N,N二异丙基碳二亚胺的含量。

技术领域

本发明涉及分析化学领域，具体涉及一种多肽中测定N,N-二异丙基碳二亚胺含量的气相分析方法。

背景技术

胸腺法新是适用于治疗慢性乙型肝炎，可作为免疫损害病者的疫苗免疫应答增强剂，为化学合成的由二十八个氨基酸组成的多肽，为N-乙酰基-L-丝氨酰-L-α-天冬氨酰-L-丙氨酰-L-丙氨酰-L-缬氨酰-L-α天冬氨酰-L-苏氨酰-L-丝氨酰-L-丝氨酰-L-α谷氨酰-L-异亮氨酰-L-苏氨酰-L-苏氨酰-L-赖氨酰-L-α-天冬氨酰-L-亮氨酰-L-赖氨酰-L-α-谷氨酰-L-赖氨酰-L-赖氨酰-L-α-谷氨酰-L-缬氨酰-L-缬氨酰-L-α-谷氨酰-L-α-谷氨酰-L-丙氨酿-L-α-谷氨酰-L-天冬酰胺，注射用胸腺法新通过刺激外周血液淋巴细胞丝裂原来促进T淋巴细胞的成熟，增加抗原或丝裂原激活后T细胞分泌的干扰素、干扰素以及白介素2、白介素3等淋巴因子水平，同时增加T细胞表面淋巴因子受体水平，还可通过对CD4细胞的激活，增强异体和自体的人类混合淋巴细胞反应。

多肽在合成过程中经常使用到N,N-二异丙基碳二亚胺作为缩合剂。如胸腺法新合成中就使用到了N,N-二异丙基碳二亚胺。此外在生长抑素、加压素等多肽的合成中同样使用了N,N-二异丙基碳二亚胺。上述药品中使用了N,N-二异丙基碳二亚胺的，均有残留的可能，且N,N-二异丙基碳二亚胺在欧洲药典给出的基因毒性杂质之警示结构一文中明确指出了N,N-二异丙基碳二亚胺具有基因毒性杂质警示结构，是一个潜在的基因毒性杂质，在药品中是要严格控制其残留量。所以建立一种检测N,N-二异丙基碳二亚胺的方法，完善多肽的质量控制，对于提升胸腺法新等多肽质量，减少患者用药风险，是非常有必要的。

目前各国药典均未收载N,N-二异丙基碳二亚胺的有效测定方法，相关文献记载了N,N-二异丙基碳二亚胺的检测方法，如深圳翰宇药业股份有限公司、一种测定N,N-二异丙基碳二亚胺的方法(专利号CN201510148254.2)，马庆华等人、多糖蛋白结合疫苗中残余碳二亚胺(EDAC)的检测方法的建立(第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会)，但是上述方法采用了液质联用的方式进行测定，该方法需要购买价格高昂的质谱，对于大多数企业而言，操作繁琐、实用性不强。

因此，建立一套操作简单，定量准确并且实用的定量分析方法、以测定多肽产品中N,N-二异丙基碳二亚胺的含量，特别是胸腺法新产品中N,N-二异丙基碳二亚胺的含量是非常有必要的，这有助于提高用药的安全性。

发明内容

针对以上技术情况，本发明提供一种测定N,N-二异丙基碳二亚胺含量的气相分析方法，特别是胸腺法新中N,N-二异丙基碳二亚胺含量的气相分析方法。本发明方法包括以下步骤：

一种多肽中测定N,N-二异丙基碳二亚胺含量的气相分析方法，包括以下步骤：

1)取N,N-二异丙基碳二酰亚胺适量，用有机溶剂和混合溶剂稀释至一定浓度，作为对照品贮备液；取待测多肽样品，加入碱性溶剂使其溶解后，再加入适量对照品贮备液，混匀并用混合溶剂稀释至一定浓度，作为对照品溶液；

2)取待测多肽样品适量，加入碱性溶剂使其溶解后，再用混合溶剂进行稀释，作为供试品溶液；

3)采用气相色谱法对上述溶液进行检测，其中气相色谱条件为：

色谱柱：以100％二甲基聚硅氧烷为固定相的色谱柱或性质相同、相似的其他色谱柱；