[发明专利]一种改良L-15培养基及其在培养对虾肌肉细胞中的应用

权利要求书

1.改良L-15培养基在培养南美白对虾肌肉细胞中的应用，其特征在于：

所述改良L-15培养基与L-15培养基的区别仅在于：

丙氨酸为10mmol/L、甘氨酸为3mmol/L、丝氨酸为3mmol/L、组氨酸为1.5mmol/L、赖氨酸为0.5mmol/L、精氨酸为1.5mmol/L、缬氨酸为1.5mmol/L、苏氨酸为1mmol/L、蛋氨酸为0.5mmol/L、亮氨酸为0.5mmol/L、天冬氨酸为5mmol/L、谷氨酰胺为0.5mmol/L、苯丙氨酸为1mmol/L，添加2.5mmol/L牛磺酸、50mmol/L脯氨酸、20mmol/L谷氨酸、10%胎牛血清、100 IU/mL青霉素和0.1mg/mL链霉素，pH值为7.2-7.4。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于包括以下步骤：取所述的改良L-15培养基，加入改良L-15培养基10%体积的对虾肌肉细胞提取液，在27℃恒温、5%CO₂中培养，每隔3d更换改良L-15培养基；

所述的对虾肌肉细胞提取液，由以下步骤制得：

（1）将对虾灭菌，然后剪取肌肉，放入添加5%双抗的PBS溶液中润洗，接着放入乙醇溶液中润洗，再放入添加5%双抗的PBS溶液中润洗，最后放入添加5%双抗的培养基1中浸泡至少30min；

（2）将对虾肌肉取出剪碎成乳糜状，加入添加10%胎牛血清和1%双抗的培养基2，将对虾肌肉吹散均匀后过筛，再加入添加5%双抗的培养基1重悬并离心，最后用添加10%胎牛血清和1%双抗的培养基2稀释，得到对虾肌肉细胞提取液；

步骤（1）和（2）所述的培养基1和培养基2，为L-15或M199培养基。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述的更换改良L-15培养基，是将培养体系离心，取沉淀物，弃去改良L-15培养基，加入新的改良L-15培养基。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：

步骤（1）所述的灭菌，是在0.02g/L的高锰酸钾溶液中浸泡至少5min；

步骤（1）所述的乙醇溶液为75%乙醇溶液。

5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：步骤（2）所述的过筛是过100μm的细胞筛。

6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：步骤（1）和（2）所述的双抗为青霉素和链霉素。