[发明专利]一种DNA及其甲基化水平的检测试剂盒和制备方法、应用

权利要求书

1.一种DNA的检测试剂盒，其特征在于，包括ssDNA1修饰的壳聚糖纤维、ssDNA2修饰的金纳米粒子；所述ssDNA1为与目的DNA一端序列互补的ssDNA；所述ssDNA2为与目的DNA另一端序列互补的ssDNA；所述壳聚糖纤维为带有荧光标记的壳聚糖纤维。

2.根据权利要求1的所述的检测试剂盒，其特征在于，所述荧光标记为FITC。

3.根据权利要求1的所述的检测试剂盒，其特征在于，所述目的DNA为p16。

4.权利要求1至3中任一项所述检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

将壳聚糖、荧光素溶于溶剂中，得到壳聚糖溶液，浓缩，制成纤维；除去纤维表面的溶剂，干燥，表面修饰环氧基团，得到环氧修饰的壳聚糖纤维；氨基修饰的ssDNA1与环氧修饰的壳聚糖纤维发生反应，得到ssDNA1修饰的壳聚糖纤维；

将金纳米粒子与巯基修饰的ssDNA2进行孵育，得到ssDNA2修饰的金纳米粒子。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，以g/mg/mL计，所述壳聚糖溶液中壳聚糖、荧光素与溶剂的比例为（0.5~5）：（1~10）：（10~50）。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述表面修饰环氧基团的方法为：乙二醇二缩水甘油醚与壳聚糖纤维在25~30℃条件下反应10~20h；

氨基修饰的ssDNA1与环氧修饰的壳聚糖纤维发生反应的温度为15~35℃，时间为3~6h。

7.一种非诊断目的检测DNA的方法，其特征在于，采用权利要求1至3中任一项所述检测试剂盒进行检测，具体为：

将ssDNA1修饰的壳聚糖纤维与经解链处理的待检测样品进行杂交反应，得到第一杂交产物；

将ssDNA2修饰的金纳米粒子与第一杂交产物进行杂交反应，得到第二杂交产物；

检测第二杂交产物的光波导荧光亮度，若荧光发生淬灭，则待检测样品中含有目的DNA，目的DNA的浓度根据标准曲线获得；若荧光未发生淬灭，则待检测样品中不含有目的DNA。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述杂交反应的温度为36~38℃，时间为1~3h。

9.一种p16 DNA甲基化水平的检测试剂盒，其特征在于，包括ssDNA1修饰的壳聚糖纤维、ssDNA2修饰的金纳米粒子、p16DNA甲基化标准试剂和HpaII酶；所述ssDNA1为与p16 DNA一端序列互补的ssDNA；所述ssDNA2为与目的DNA另一端序列互补的ssDNA；所述壳聚糖纤维为带有荧光标记的壳聚糖纤维；

所述ssDNA1序列为5'-GCCGGACGCCTG-3';

所述ssDNA2序列为:5'-GAACGCAACTCC-3'。

10.一种非诊断目的检测p16 DNA甲基化水平的方法，其特征在于，采用权利要求9所述检测试剂盒进行检测，具体为：

将ssDNA1修饰的壳聚糖纤维与经解链处理的待检测样品进行杂交反应，得到第一杂交产物；

将ssDNA2修饰的金纳米粒子与第一杂交产物进行杂交反应，得到第二杂交产物后经HpaII酶切；

检测第二杂交产物的光波导荧光亮度，根据标准曲线获得p16DNA甲基化水平；

所述ssDNA1序列为5'-GCCGGACGCCTG-3';

所述ssDNA2序列为:5'-GAACGCAACTCC-3'。