[发明专利]一种酿酒酵母表达长效重组纤连蛋白及其在化妆品中的应用

说明书

本发明公开了一种酿酒酵母表达长效重组纤连蛋白及其在化妆品中的应用，该长效重组纤连蛋白的核苷酸序列如Seq ID NO.1所示，长效重组纤连蛋白包括FN的功能片段、HAS；FN的功能片段包括FNIII1C单元；FNIII1C单元为FN中第1个III型FN重复单元C端的一个功能片段。FNIII1C为天然人FN中第1个III型FN重复单元C端的一个功能片段，具有抗肿瘤、抗转移和抑制血管增生的功能。该蛋白还能够使生物体中的FN发生超聚化，大大增强FN促细胞粘附、抗细胞迁移的能力。融合HAS有效的提高了重组蛋白的稳定性。本发明的长效重组纤连蛋白可提高细胞的贴壁率、汇合率，缩短细胞汇合时间，使细胞形态结构良好、代谢率增强及蛋白质合成速度显著提高，具有促细胞修复的功效。

技术领域

本发明涉及新兴生物医学领域，尤其涉及一种酿酒酵母表达长效重组纤连蛋白，一种长效重组纤连蛋白促牛肾细胞贴壁活性检测的检测方法，以及一种酿酒酵母表达长效重组纤连蛋白在化妆品中的应用。

背景技术

天然纤连蛋白(fibronectin，FN)是一种高分子量的糖蛋白，是胞外基质中最为主要的组分之一，广泛存在于血液、体液及各种组织中。在脊椎动物中，FN高度保守且具有相同的组织结构。FN以二聚体形式存在，由两条分子量约为250kDa的多肽链通过C端的二硫键结合组成。每条链包含一连串的重复单元：12个I型、2个II型和7个III型重复单元。这些重复单元组成与纤维蛋白、胶原蛋白、明胶、细菌和细胞结合的功能域以发挥多种生物学功能，如调理作用、吞噬作用、血管生成、胚胎形成、组织结构和重新塑造等，还在许多病理过程起重要作用，如多发性关节炎和肿瘤。目前FN已经用于新兴生物医学领域，如肿瘤、创伤愈合、抑菌及组织工程材料等，也开始应用于美容护肤领域。

人血清白蛋白(Human serum albumin，HAS)是人体血液中的主要蛋白，由585个氨基酸构成，是人体循环系统内的含量最多的可溶性蛋白，在血液中的浓度为34-54g/L。HSA由肝脏合成，血清半衰期长，可达19天。HSA在调节血液渗透压、营养和促进伤口愈合等方面发挥重要作用，广泛用于肝硬化腹水、烧伤、休克等临床治疗。此外，HSA具有无免疫原性、人体相容性好、组织分布广和无酶活等特性，使其成为非常理想的重组蛋白融合载体。通过构建融合蛋白技术能够增加重组蛋白的分子量从而延长半衰期，有效的提高重组蛋白的稳定性。

目前FN的获得主要通过两条途径：一是从生物的组织细胞或体液中提取；二是运用基因工程技术构建表达载体，利用宿主表达重组FN。由于天然FN分子量大，全序列表达可行性低，主要是选取FN不同功能的结构域进行表达或组合表达，以获得具有不同功能的重组FN。天然提纯FN工艺复杂、成本高，且产品分子量大使其推广应用受到了限制。而利用基因工程技术表达外源基因已成为获取目的蛋白的高效途径之一，根据表达载体和宿主菌的不同，主要分为原核表达和真核表达。原核表达系统虽成本低廉，但该系统存在容易形成包涵体、获得的蛋白生物学活性较低等缺陷，而利用真核表达系统进行外源表达能够获得较高活性的目的蛋白。

酿酒酵母在医药和食品工业中是公认的安全微生物体，其生化和遗传研究已经非常详细。酿酒酵母分泌表达系统为真核表达系统，能够高水平表达蛋白质分泌到培养基中，产品生产工艺简单、成本低、产物均一、无免疫原性。

发明内容

为了克服天然提纯FN工艺复杂、成本高；天然FN分子量大，全序列表达可行性低，使其推广应用受到限制；现有原核表达系统存在容易形成包涵体、获得的FN蛋白生物学活性较低等缺陷的技术问题，本发明提供一种酿酒酵母表达长效重组纤连蛋白，一种长效重组纤连蛋白促牛肾细胞贴壁活性检测的检测方法，以及一种酿酒酵母表达长效重组纤连蛋白在化妆品中的应用。

本发明采用以下技术方案实现：一种酿酒酵母表达长效重组纤连蛋白，其包括：长效重组纤连蛋白的核苷酸序列如Seq ID NO.1所示，长效重组纤连蛋白包括FN的功能片段、HAS；FN的功能片段包括FNIII1C单元；FNIII1C单元为FN中第1个III型FN重复单元C端的一个功能片段。