[发明专利]一种能稳定表达ABEmax蛋白的细胞株及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种能稳定表达ABEmax蛋白的细胞株的制备方法，其特征在于，包括以下步骤:

S1、设计并构建能表达ABEmax基因、抗生素筛选标记的piggyBac载体;

其中，所述ABEmax基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示; 所述抗生素筛选标记为嘌呤霉素抗性基因；利用T2A元件将嘌呤霉素抗性基因连接到PiggyBac载体的工作元件中；

ABEmax扩增引物：

ABEmax-F：atgaaacggacagccgacggaagcgagtt

ABEmax-R：gactttcctcttcttcttgggctcgaatt

PiggyBac载体扩增引物：

PiggyBac-F：aagaagaggaaagtcgaattcgaaggatccgcggccgct

PiggyBac-R：ggctgtccgtttcatggtggctctagagtaggcgccggt

S2、将扩增获得的ABEmax产物与扩增获得的piggyBac载体产物利用同源同组的方法连到一起，构成PiggyBac-ABEmax蛋白表达载体，将所述PiggyBac-ABEmax蛋白表达载体和转座酶基因载体共转入工具细胞293T细胞，通过抗生素筛选阳性细胞株并对筛选出的阳性细胞株进行编辑效果鉴定;

S3、将有编辑效果的细胞株经过抗生素筛选后流式分选单克隆细胞系;

S4、单克隆细胞经过PCR验证和编辑效果验证后即得稳定表达ABEmax蛋白的细胞株。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述ABEmax基因还包括核定位信号序列NLS。

3.如权利要求1至2任一项所述的制备方法得到的细胞株。

4.一种制备碱基编辑细胞系的方法，其特征在于，包括以下步骤:使用如权利要求3所述的细胞株作为工具细胞进行后续碱基编辑操作，获得所述碱基编辑细胞系。