[发明专利]一种检测新冠病毒的试剂盒及其检测方法和应用

说明书

本发明属于生物医药领域，具体涉及采用Pt‑Pd合金纳米颗粒标记的免疫层析法制备的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒及其检测方法和应用。一种检测新冠病毒的试剂盒，含有新冠病毒SARS‑CoV‑2中和抗体Pt‑Pd合金纳米颗粒试纸条。所述新冠病毒SARS‑CoV‑2中和抗体Pt‑Pd合金纳米颗粒试纸条的制备方法为用合金纳米颗粒标记新冠病毒SARS‑CoV‑2抗原作为捕获抗体纳米标记物，再将纯化的A型表达抗原及其抗体包被在纤维素膜上，分别作为检测线T线和质控线C线，经条件优化，建立新冠病毒中和抗体Pt‑Pd合金纳米颗粒试纸条。该试剂盒操作和携带方便，具备较高灵敏度，相比胶体金灵敏度可提高24倍，同时具备可操作性与重现性，可用于新型冠状病毒引起的肺炎的诊断。

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种抗体检测试剂盒，具体涉及采用 Pt-Pd 合金纳米颗粒标记的免疫层析法制备的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒及其检测方法和应用。

背景技术

新型冠状病毒肺炎（Corona Virus Disease 2019，COVID-19）自爆发以来，在全球范围内迅速席卷多数国家，并还在持续蔓延。截止到2021年2月27日，国内现有确诊人数523人，累计确诊人数101872人；国外现有确诊人数24682961人，累计确诊人数113938891人。无论是新冠的检测、预防还是治疗，各国都承受着巨大的压力。

目前已开发出的诊断试剂盒按检测目标可以分为两类，一类是检测病毒的核酸，一类是检测病毒的抗体。但这些诊断试剂盒还存在有很多局限性，假阴性率过高，以致无法完全满足防疫及临床工作的需求。特别是流行病学调查普检的需求：核酸检测试剂盒的特异性接近100%，但由于取样困难等原因导致灵敏度偏低，仅为30%-50%，即存在较多的漏检：使用S蛋白、N蛋白等SARS-CoV-2组成蛋白的抗体检测试剂盒的灵敏度可达95%以上，但由于原理缺陷导致特异性偏低（特别是对于一些疾病的患者，其体内的非SARS-CoV-2抗体也能被这些组成蛋白识别），即存在较多的误检。迫切切需要研就开方一种准确、快速的检测方法，快速发现大量感染患者和无症状携带者，防止病毒传播，确保患者得到及时治疗。

发明内容

鉴于现有技术存在的问题问题，本发明的目的在于提供一种采用 Pt-Pd 合金纳米颗粒标记的免疫层析法制备的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒及其检测方法和应用，该试剂盒操作和携带方便，具备较高灵敏度，相比胶体金灵敏度可提高 24倍，同时具备可操作性与重现性，可用于新型冠状病毒(SARS-CoV-2)引起的肺炎的诊断。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案。

一种检测新冠病毒的试剂盒，含有新冠病毒SARS-CoV-2中和抗体 Pt-Pd 合金纳米颗粒试纸条。

所述新冠病毒SARS-CoV-2中和抗体 Pt-Pd 合金纳米颗粒试纸条的制备方法为用合金纳米颗粒标记新冠病毒SARS-CoV-2抗原作为捕获抗体纳米标记物，再将纯化的A 型表达抗原及其抗体包被在纤维素膜上，分别作为检测线T 线和质控线C 线，经条件优化，建立新冠病毒(SARS-CoV-2)中和抗体 Pt-Pd 合金纳米颗粒试纸条。

进一步地，所述的合金纳米颗粒是通过抗坏血酸AA还原 K₂PtCl₄和Na₂PdCl₄制备的。

进一步地，所述的纤维素膜是硝酸纤维素膜（NC膜），在试纸条中用做C/T线的承载体，同时也是免疫反应的发生处。

一种新冠病毒的检测方法，具体包括以下步骤。

步骤1、制备新冠病毒SARS-CoV-2中和抗体 Pt-Pd 合金纳米颗粒试纸条。

步骤2、样品定性检测：向试纸卡的样品孔中加入 35 μL 待检血清，之后再加入等体积稀释液，反应 10 min 后向NC 膜反应区加入 TMB 显色剂，随即进行结果判定。