[发明专利]一种检测新冠病毒的试剂盒及其检测方法和应用

权利要求书

1.一种检测新冠病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有新冠病毒SARS-CoV-2中和抗体 Pt-Pd 合金纳米颗粒试纸条。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述新冠病毒SARS-CoV-2中和抗体 Pt-Pd合金纳米颗粒试纸条的制备方法为用合金纳米颗粒标记新冠病毒SARS-CoV-2抗原作为捕获抗体纳米标记物，再将纯化的A 型表达抗原及其抗体包被在纤维素膜上，分别作为检测线T 线和质控线C 线，经条件优化，建立新冠病毒中和抗体 Pt-Pd 合金纳米颗粒试纸条。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述的Pt-Pd合金纳米颗粒是通过抗坏血酸AA还原 K₂PtCl₄和Na₂PdCl₄制备的。

4.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述的纤维素膜是硝酸纤维素膜。

5.一种新冠病毒的检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

步骤1、制备新冠病毒SARS-CoV-2中和抗体 Pt-Pd 合金纳米颗粒试纸条；

步骤2、样品定性检测：向试纸卡的样品孔中加入 35 μL 待检血清，之后再加入等体积稀释液，反应 10 min 后向NC 膜反应区加入 TMB 显色剂，随即进行结果判定；

步骤3、样品定量检测：判定值CUT-OFF的确定，分别取已知抗体效价为 1:64、1:128、1:256 和 1:512 的阳性血清各 1 份，步骤1制备的试纸条进行检测，每份血清重复检测 10次，用金标免疫分析仪扫描读取信号 T/C 比值，将 T/C 比值的平均值作为 CUT-OFF 值，并建立标准曲线；

步骤4、结果判定：定性检测结果判定标准，阳性，C线和T线的显色；阴性，C线显色，T线不显色；可疑，C线显色，T线若隐若现，颜色很浅；无效，C线不显色；定量检测结果判定标准，建立定量标准曲线，将待测血清的T/C值带入标准曲线，即可对应获得该份血清的抗体效价。

6.如权利要求5所述的检测方法，其特征在于，步骤1的具体制备方法如下：

步骤1、Pt-Pd 合金纳米颗粒的制备：分别取K₂PtCl₄、Na₂PdCl₄、HCl、抗坏血酸加入普朗尼克-F127 中，充分混匀，加热超声处理 5 h；将处理后用丙酮和纯水交替洗 5 次，每次洗完均离心 3 000 r/min，5 min，弃去上清，收集沉淀，4℃备用；采用透射电子显微镜对 Pt-Pd 合金纳米颗粒的超微结构进行扫描，观察其聚集状态及粒径分布；

步骤2、Pt-Pd 合金纳米颗粒标记最适缓冲体系的确定：分别取磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液和碳酸盐缓冲液配制Pt-Pd 合金纳米颗粒溶液，观察，继续搅拌 20 min，再观察Pt-Pd 合金纳米颗粒的稳定性以及是否会发生聚沉；

步骤3、Pt-Pd 合金纳米颗粒标记抗原量的优化：选择最适条件的 Pt-Pd 合金纳米颗粒溶液，组装试纸条，比较试纸条跑条结果，以确定 Pt-Pd 合金纳米颗粒标记抗原时的最佳抗体量；

步骤4、Pt-Pd 合金纳米颗粒试纸条的制备：将最佳标记量的 FMDV 抗原超离部分加入Pt-Pd合金纳米颗粒溶液中，磁力搅拌之后离心，将沉淀用相应缓冲液重悬喷涂于玻璃纤维制成合金标记垫；将纯化好的 FMDV-146S 与 FMDV-146S-Ab 倍比稀释后确定最佳包被量并分别标记于 NC 膜的 T 线与C 线，按顺序装配，即制成新冠病毒SARS-CoV-2中和抗体Pt-Pd 合金纳米颗粒试纸条。

7.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述新冠病毒SARS-CoV-2中和抗体 Pt-Pd 合金纳米颗粒试纸条在制备新型冠状病毒SARS-CoV-2引起的肺炎诊断试剂盒中的应用。

8.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述新冠病毒SARS-CoV-2中和抗体 Pt-Pd 合金纳米颗粒试纸条在制备用于新型冠状病毒引起的肺炎的诊断的新型冠状病毒SARS-CoV-2中和抗体检测试剂盒中的用途。