[发明专利]一种食源性唐菖蒲伯克霍尔德氏菌的快速检测方法在审
| 申请号： | 202110351695.8 | 申请日： | 2021-03-31 |
| 公开（公告）号： | CN113201594A | 公开（公告）日： | 2021-08-03 |
| 发明（设计）人： | 张娟;綦艳;佘之蕴;周臣清;严家俊;杨纯佳 | 申请（专利权）人： | 广东产品质量监督检验研究院（国家质量技术监督局广州电气安全检验所;广东省试验认证研究院;华安实验室） |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/06;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 510000 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 食源性 唐菖蒲 霍尔 德氏菌 快速 检测 方法 | ||
1.一种食源性唐菖蒲伯克霍尔德氏菌的快速检测方法，其特征在于，包括：在聚合酶反应体系中进行聚合酶链式反应，所述的反应体系中含有扩增唐菖蒲伯克霍尔德氏菌的特异性引物对和唐菖蒲伯克霍尔德氏菌特异性探针；所述的扩增唐菖蒲伯克霍尔德氏菌的特异性引物对包括：SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物；
所述的唐菖蒲伯克霍尔德氏菌特异性探针是Taqman探针。
2.根据权利要求1所述的食源性唐菖蒲伯克霍尔德氏菌的快速检测方法，其特征在于，所述的唐菖蒲伯克霍尔德氏菌特异性探针具有选自以下的核苷酸序列：如SEQ ID NO.3所示。
3.根据权利要求2所述的食源性唐菖蒲伯克霍尔德氏菌的快速检测方法，其特征在于，在探针中间距5’端37bp 的位置处采用dSpacer修饰，dSpacer分子两侧的分别被荧光基团和淬灭基团取代，在探针的3’末端通过基团phosphate修饰。
4.根据权利要求3所述的食源性唐菖蒲伯克霍尔德氏菌的快速检测方法，其特征在于，所述荧光基因采用FAM，所述淬灭基团采用BHQ1。
5.根据权利要求1-4任一项所述的食源性唐菖蒲伯克霍尔德氏菌的快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.提取待测样品的DNA；
S2.根据如权利要求1所述的序列组成合成特异性引物，与根据权利要求2的序列组成合成特异性探针；
S3.在反应管中进行扩增反应，同时利用荧光收集器收集荧光信号。
6.根据权利要求5所述的食源性唐菖蒲伯克霍尔德氏菌的快速检测方法，其特征在于，步骤S3中，包括以下操作步骤：向装有反应干粉的检测单元管中加入40.9μL A Buffer、2.0μL上游引物（10μM）、2.0μL下游引物（10μM）、0.6 μL探针（10μM），最后加入2.0μL待测DNA样本，再向检测单元管盖上加入2.5μL的Buffer,盖上管盖，上下颠倒充分混匀5-6次，低速离心10 sec,混匀后将检测单元管放入荧光定量PCR仪中，开始检测。
7.根据权利要求6所述的食源性唐菖蒲伯克霍尔德氏菌的快速检测方法，其特征在于，步骤S3中，扩增程序为：荧光通道选择FAM通道，反应程序：预热37-41℃，35-48s,1-3个循环，不采集荧光信号；扩增37-41℃，25-35s,35-45个循环，采集荧光信号。
8.根据权利要求7所述的食源性唐菖蒲伯克霍尔德氏菌的快速检测方法，其特征在于，步骤S3中，扩增程序为：荧光通道选择FAM通道，反应程序：预热39℃，40s,1个循环，不采集荧光信号；扩增39℃，30s,40个循环，采集荧光信号。
9.根据权利要求8所述的食源性唐菖蒲伯克霍尔德氏菌的快速检测方法，其特征在于，在检测食品中唐菖蒲伯克霍尔德氏菌的应用。
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