[发明专利]一种蚕丝蛋白质组学的蛋白质提取与富集方法

说明书

本发明涉及文物检测技术领域，本发明公开了一种蚕丝蛋白质组学的蛋白质提取与富集方法，本发明将丝蛋白溶解，通过羧基盐修饰的顺磁珠与有机溶剂的共同作用，使蚕丝蛋白富集在磁珠上，通过磁性分离，使蛋白质从溶液中提取出来，且由于磁珠属于固相且被磁场固定，对蛋白质的洗涤纯化简单便捷，纯化效果好。

技术领域

本发明涉及文物检测技术领域，尤其涉及一种蚕丝蛋白质组学的蛋白质提取与富集方法。

背景技术

丝绸在中国历史上有着举足轻重的地位，丝绸之路是一条古代从黄河流域和长江流域出发，经印度、中亚、西亚连接北非和欧洲，以丝绸贸易为主要媒介的文化交流之路。丝绸在中国古代文化交流中起到重要的纽带作用，是中国传统文化的重要组成部分，在考古过程中，各种出土织物也向所有科学家诉说着中国的灿烂文明。但丝绸文物不同于石器、青铜器，丝作为一种有机物在长时间的埋藏过程中难以保存完整，时间越长，残留下来的痕迹越少。对中国丝绸的起源研究一直是我们研究的重点，对丝绸文物老化、劣化机理的研究也是对出土文物保存的关键。

目前对丝绸文物的研究还停留在扫描、红外等二级结构的表征上，难以在分子层面研究丝绸的特征，目前最好的蛋白质纤维辨别方法为ELISA，但ELISA仅能区分蛋白质纤维，却对它们的蛋白质与多肽组成，在老化过程中的变化没有任何研究，因此一种更为细致的微量蛋白质研究手段需要被开发。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种蚕丝蛋白质组学的蛋白质提取与富集方法。本发明将丝蛋白溶解，通过羧基盐修饰的顺磁珠与有机溶剂的共同作用，使蚕丝蛋白富集在磁珠上，通过磁性分离，使蛋白质从溶液中提取出来，且由于磁珠属于固相且被磁场固定，对蛋白质的洗涤纯化简单便捷，纯化效果好。

本发明的具体技术方案为：

一种蚕丝蛋白质组学的蛋白质提取与富集方法，包括以下步骤：

1）取4-6mg丝素蛋白粉末于离心管中并加入1.5-2.5mL裂解液，常温反应1.5-2.5h，加入1.5-2.5mL碳酸氢铵溶液，得到蚕丝溶解液。

2）取1-1.5mL蚕丝溶解液加入至离心管中，置入恒温混匀仪中，55-65℃加热20-40分钟，转速为800-1200转/分。

3）将离心管从恒温混匀仪上取出，冷却至室温，加入80-120μL碘乙酰胺原液，将还原的二硫化物烷基化，室温暗箱孵育20-40分钟。

4）向离心管中加入40-60μL二硫苏糖醇浆液，室温下孵育10-20分钟。

5）取20-25μL步骤4）所得混合液，稀释至最终体积为90-100μL，加入180-220μg顺磁珠，混合均匀。

6）向步骤5)所得重组液中加入含80-120μL乙醇的试管中，短暂摇动进行均质，在20-25°C的恒温混匀仪中800-1200转/分孵育3-7分钟。

本发明加入的顺磁珠上含有大量的羧酸盐，会和亲水表面与有机溶剂共同作用，从而吸附提取蛋白质，吸附机制无蛋白选择性，可以全蛋白吸附。

7）把步骤6）处理后的试管置于磁架上，进行孵育，直至磁珠迁移至管壁，除去液相后洗涤。

本发明利用顺磁珠与磁场的相互作用力，固液分离，使得纯化过程简单高效，纯化效果好。