[发明专利]一种脱细胞基质支架的制备方法及通过该方法获得的脱细胞基质支架

权利要求书

1.一种脱细胞基质支架的制备方法，其特征在于包括：

交联步骤：将经脱细胞处理的天然软骨基质注入模具中冷冻干燥后进行紫外交联4-8h，然后加入EDC和NHS的混合溶液再进行交联20-24h，清洗并冷冻干燥、灭菌，得到脱细胞基质支架。

2.如权利要求1所述的脱细胞基质支架的制备方法，其特征在于，交联步骤中，两次所述冷冻干燥的条件均为温度-60℃，时间24-48h。

3.如权利要求1所述的脱细胞基质支架的制备方法，其特征在于，交联步骤中，所述EDC和NHS的混合溶液以95vt％乙醇溶液作为溶剂，EDC和NHS的浓度为2mol/L。

4.如权利要求1所述的脱细胞基质支架的制备方法，其特征在于，交联步骤中，所述灭菌为以钴60进行辐照灭菌。

5.如权利要求1所述的脱细胞基质支架的制备方法，其特征在于，交联步骤前还包括脱细胞步骤：

将天然关节软骨粉碎，加入HCl溶液并在温度为4-26℃的条件下震荡混匀后取沉淀，将沉淀清洗；在沉淀中加入蛋白酶溶液，温度为4-26℃的条件下搅拌96-120h，然后加入NaOH溶液调节至中性，离心取上清；在上清中加入NaCl溶液，进行差速离心，每一次离心后除去部分上清液，最后一次离心后除去全部上清液，取沉淀物；将沉淀物进行透析，得到经脱细胞处理的天然软骨基质。

6.如权利要求5所述的脱细胞基质支架的制备方法，其特征在于，脱细胞步骤中，所述HCl溶液的浓度为2-4mol/L；所述震荡混匀的时间为24-48h；所述蛋白酶溶液的浓度为1-3g/L；所述NaOH溶液的浓度为1mol/L；所述NaCl溶液的浓度为1-4mol/L。

7.如权利要求5所述的脱细胞基质支架的制备方法，其特征在于，脱细胞步骤中，所述差速离心为第一次离心的转速为2000-3000r/min，离心后除去50％上清液；第二次离心的转速为4000-5000r/min，离心后除去50％上清液；第三次离心的转速为6000-7000r/min，离心后除去50％上清液；第四次离心的转速为9000-12000r/min，离心后除去全部上清液。

8.如权利要求5所述的脱细胞基质支架的制备方法，其特征在于，脱细胞步骤中，所述透析为将沉淀物装入截留分子量8000-14000d的透析袋中进行透析，放入20-30倍的注射用水透析48-96h，每12-24h更换一次水，得到经脱细胞处理的天然软骨基质。

9.一种脱细胞基质支架，其特征在于，所述脱细胞基质支架通过如权利要求1所述的制备方法得到。

10.如权利要求9所述的脱细胞基质支架，其特征在于，所述脱细胞基质支架为圆形或多边形；所述支架为多孔结构，孔径30-300μm，最大厚度为2-3mm。