[发明专利]一种利用重组大肠杆菌全细胞催化合成L-苹果酸的方法有效
| 申请号： | 202110338550.4 | 申请日： | 2021-03-30 |
| 公开（公告）号： | CN113061563B | 公开（公告）日： | 2023-03-24 |
| 发明（设计）人： | 尹龙飞;付永前;罗希;郑伟龙;孙小龙 | 申请（专利权）人： | 台州学院 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12P7/46;C12N9/88;C12R1/19 |
| 代理公司： | 重庆项乾光宇专利代理事务所(普通合伙) 50244 | 代理人： | 侯玉花 |
| 地址： | 318000 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 重组 大肠杆菌 细胞 催化 合成 苹果酸 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种利用重组大肠杆菌全细胞催化合成L-苹果酸的方法，其特征在于，具体如下：构建表达富马酸酶基因的大肠杆菌工程菌，液体培养工程菌，离心收集湿菌体细胞，加入反应底物富马酸钠，待反应完全，收集反应液；所述富马酸酶基因来自耐辐射球菌；所述反应温度为35℃；所述反应时间为10h；所述反应pH为7；所述反应体系中，每10mL转化合成体系中添加1g富马酸钠和0.1g湿菌体细胞；所述的反应体系中还添加有终浓度为50mmoL.L-1的Ca2+或/和终体积分数为0.03％～0.06％的烷基酚聚氧乙烯醚OP；
构建表达富马酸酶基因的大肠杆菌工程菌的过程如下：设计引物DR2627up和DR2627dn，以耐辐射球菌的基因组DNA为模板进行PCR扩增；将PCR产物与T载体连接后转化感受态细胞DH5α并进行筛选培养获得阳性重组细胞；从阳性重组细胞中抽提质粒并进行酶切，并将酶切片段插入pET22b载体构建重组质粒pET22b-fumC，将重组质粒pET22b-fumC转入感受态细胞BL21并进行筛选培养获得重组富马酸酶基因工程菌；所述的引物DR2627up和DR2627dn的核苷酸序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示。
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