[发明专利]一种水解氨基酸的检测方法

说明书

本发明公开了一种水解氨基酸的检测方法，属于检测技术领域。本发明所述水解氨基酸的检测方法首先将待测氨基酸在特定条件下进行充分酸化水解，随后使用氧化性强且无毒的过氧化氢或过碳酸钠对水解氨基酸氧化为特定产物，避免传统方法检测过程中待测样品中部分特定氨基酸(如胱氨酸、蛋氨酸和酪氨酸)因部分降解而失准，或者使用有毒、腐蚀设备及污染环境的试剂；所述检测方法对设备要求低，操作简单，检测准度高，检测时间大大缩减，适用于常规水解氨基酸及特殊氨基酸(如胱氨酸、蛋氨酸和酪氨酸)的检测。

技术领域

本发明涉及检测技术领域，具体涉及一种水解氨基酸的检测方法。

背景技术

我国国家标准《GB 5009.124-2016食品安全国家标准食品中氨基酸的测定》规定了氨基酸分析仪法测定16种水解氨基酸的方法，所述方法的检测步骤为：样品经酸水解后，取水解液真空干燥并复溶后，经分离柱分离后与茚三酮衍生检测含量。该检测方法虽满足一般水解氨基酸的检测要求，需要使用有毒试剂)苯酚，且对于如胱氨酸等这类具有重要功效的必要氨基酸的含量检测则因在检测过程中胱氨酸的部分氧化出现测量不准且处理时长过长的缺陷(其中酸水解长达22h，真空干燥需要超过2h)。

在此基础上，现有技术1为国家标准《GB/T 15399-2018饲料中含硫氨基酸的测定离子交换色谱法》规定了氨基酸分析仪法测定含硫氨基酸的方法，所述方法的步骤为：样品经过甲酸氧化和酸酸水解后，取水解液真空干燥并复溶后，经分离柱分离后与茚三酮衍生检测含量。该方法相对于GB 5009.124-2016因进行了氧化处理，使氨基酸在检测时较为稳定，不会被氧化；然而该氧化处理会影响某些氨基酸(如酪氨酸)的测定，仅限于含硫氨基酸种类的检测。此外，所用过甲酸使用时需要现配现用，氧化后需要使用终止剂，且该终止剂为剧毒试剂(如氢溴酸)，最终需去除，但是去除方法多为真空去除(该物质会生成溴水)，存在一定的设备腐蚀及环境污染，而所述过甲酸也具有强烈刺激性气味。

现有技术2为公开文献《蛋白质酸水解液用过甲酸氧化处理对胱氨酸的测定》，该文献中公开了一种胱氨酸的测试方法，所述方法步骤为：样品经酸水解后，1份测常规水解氨基酸，1份经过甲酸氧化真空干燥再复溶后测其中的胱氨酸含量。该公开技术与现有技术1相似，所用氧化剂(过甲酸)有强烈刺激性气味，需在通风橱操作；该方案在采用真空干燥除去过甲酸，等待时间长，容易腐蚀真空设备和污染环境；该方案需进行2次上机测试才能获得常规水解氨基酸和胱氨酸的结果。

现有技术3为国家标准《中国药典》2015年版中第一部《阿胶含量测定中测试方法》：样品经高温酸水解后，经蒸干复溶后与PITC衍生，经液相分离柱分离后检测含量，然而该公开技术仅限于检测阿胶中脯氨酸、羟脯氨酸、甘氨酸及丙氨酸的含量。

终上所述，目前并没有一种水解氨基酸的检测方法，可用于准确检测多种水解氨基酸(包括如胱氨酸、蛋氨酸和酪氨酸)，且所述方法检测效率快，使用试剂绿色无毒。

发明内容

基于现有技术的不足，本发明的目的在于提供了一种水解氨基酸的检测方法，该方法具有检测效率高，操作步骤简单以及使用试剂绿色无毒、检测范围广，准度高的特点。

为了达到上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种水解氨基酸的检测方法，包括以下步骤：

(1)样品水解：将待测样品与盐酸溶液混合并在130～170℃中保温1h以上，降温，得水解后待测混合液；

(2)样品氧化：将步骤(1)所得水解后待测混合液加入氧化剂并在50～100℃下反应5～120min，降温，用pH为2～2.5的柠檬酸钠溶液定容至刻度，过滤，得氧化后待测混合液；所述氧化剂为过氧化氢溶液或过碳酸钠；

(3)样品检测：配制浓度为10～50mg/L的待测标准溶液，将步骤(2)所得氧化后待测混合液进行定性定量检测；所述待测标准溶液经过步骤(2)所述处理条件处理。