[发明专利]一种生物体或组织中dsRNA及提取该dsRNA的方法有效
申请号: | 202110334831.2 | 申请日: | 2021-03-29 |
公开(公告)号: | CN112961851B | 公开(公告)日: | 2023-05-23 |
发明(设计)人: | 章松柏;王寅;刘明宏;王小彦;管何冉 | 申请(专利权)人: | 贵州省烟草公司遵义市公司;长江大学 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10;C12N15/113 |
代理公司: | 武汉智嘉联合知识产权代理事务所(普通合伙) 42231 | 代理人: | 丁倩 |
地址: | 563000 贵*** | 国省代码: | 贵州;52 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 生物体 组织 dsrna 提取 方法 | ||
1.从生物体或组织中提取dsRNA的方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1、获取生物体或组织,粉碎后混入有机试剂进行处理,离心;
S2、取离心上清液,混入提取试剂作为上样液上样层析柱,促使上样液中dsRNA可逆性地吸附于层析柱中的填料上;
S3、采用第一溶液和第二溶液依次对层析柱中填料进行分段洗脱,得到第一洗脱液和第二洗脱液,收集所述第二洗脱液进行后续处理以得到最终的dsRNA;
所述有机试剂为苯酚、氯仿、异戊醇的混合溶液;
所述提取试剂包含16%wt的乙醇;
所述填料为硅化微晶纤维素粉;
所述硅化微晶纤维素粉在层析柱中沉降压实并到达层析柱的3/4处,所述层析柱上端连接有细管且下端连接有蠕动泵;
所述第一溶液为包含16%wt乙醇的STE缓冲溶液,所述第二溶液为STE缓冲溶液。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,苯酚、氯仿和异戊醇的体积比为25:24:1。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述S1步骤中,先将粉碎的粉末混入STE缓冲溶液,后再与等体积的所述有机溶剂进行混合。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述S3步骤中,后续处理包括以下步骤:
向所述第二洗脱液中加入异丙醇,于-20℃条件下冷冻;离心,取沉淀;及加入乙醇水溶液后再次离心,取沉淀,用DEPC溶解后于-20℃条件保存。
5.权利要求1-4任一项所述的方法制备得到的包含于生物体或组织中的dsRNA。
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