[发明专利]一种生物体或组织中dsRNA及提取该dsRNA的方法有效

专利信息
申请号: 202110334831.2 申请日: 2021-03-29
公开(公告)号: CN112961851B 公开(公告)日: 2023-05-23
发明(设计)人: 章松柏;王寅;刘明宏;王小彦;管何冉 申请(专利权)人: 贵州省烟草公司遵义市公司;长江大学
主分类号: C12N15/10 分类号: C12N15/10;C12N15/113
代理公司: 武汉智嘉联合知识产权代理事务所(普通合伙) 42231 代理人: 丁倩
地址: 563000 贵*** 国省代码: 贵州;52
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摘要:
搜索关键词: 一种 生物体 组织 dsrna 提取 方法
【权利要求书】:

1.从生物体或组织中提取dsRNA的方法,其特征在于,包括以下步骤:

S1、获取生物体或组织,粉碎后混入有机试剂进行处理,离心;

S2、取离心上清液,混入提取试剂作为上样液上样层析柱,促使上样液中dsRNA可逆性地吸附于层析柱中的填料上;

S3、采用第一溶液和第二溶液依次对层析柱中填料进行分段洗脱,得到第一洗脱液和第二洗脱液,收集所述第二洗脱液进行后续处理以得到最终的dsRNA;

所述有机试剂为苯酚、氯仿、异戊醇的混合溶液;

所述提取试剂包含16%wt的乙醇;

所述填料为硅化微晶纤维素粉;

所述硅化微晶纤维素粉在层析柱中沉降压实并到达层析柱的3/4处,所述层析柱上端连接有细管且下端连接有蠕动泵;

所述第一溶液为包含16%wt乙醇的STE缓冲溶液,所述第二溶液为STE缓冲溶液。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,苯酚、氯仿和异戊醇的体积比为25:24:1。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述S1步骤中,先将粉碎的粉末混入STE缓冲溶液,后再与等体积的所述有机溶剂进行混合。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述S3步骤中,后续处理包括以下步骤:

向所述第二洗脱液中加入异丙醇,于-20℃条件下冷冻;离心,取沉淀;及加入乙醇水溶液后再次离心,取沉淀,用DEPC溶解后于-20℃条件保存。

5.权利要求1-4任一项所述的方法制备得到的包含于生物体或组织中的dsRNA。

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