[发明专利]一种新型CCK8细胞活力检测试剂盒及其应用

说明书

本发明提供一种CCK8检测试剂盒及其应用，所述CCK8检测试剂盒包括添加因子一和添加因子二；所述添加因子一包括以下终浓度的组分：透明质酸酶0.5‑1mg/mL，EDTA 0.1‑0.5mg/mL，盐酸0.02‑0.05mol/L；所述添加因子二包括以下终浓度的组分：wst‑8 0.08‑0.2mg/mL，1‑Methoxy PMS0.05‑0.3mg/mL，钙盐0.1‑0.5mg/mL；所述添加因子一和所述添加因子二的溶剂均为无菌水。该试剂盒应用在类器官药敏活力检测中，反应时间短，准确性和重复性方面优于一般的CCK8药敏检测方法。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种CCK8检测试剂盒及其应用。

背景技术

CCK8法是一种常见的检测方法，其检测原理为活细胞中的琥珀酸脱氢酶与WST–8进行反应生成黄色甲臜产物，它是一种高度水溶性黄色甲臜染料，黄色甲臜染料的数量与活细胞成正比，因此可以反映活细胞数量。

一般的CCK8检测试剂盒只能作用于2D细胞，可以实现快速检测，且稳定准确，但是在3D类器官上却表现出反应不完全，反应时间长等现象，且药敏结果也呈现重复性及稳定性较差的情况，因此，亟待开发一种可以用于类器官的CCK8药敏检测试剂盒，以实现类器官药敏活力的快速、稳定、准确地检测。

发明内容

有鉴于此，本发明旨在提供一种CCK8检测试剂盒及其应用以解决上述问题。本发明的技术方案为：

第一个方面，本发明提供一种CCK8检测试剂盒，包括添加因子一和添加因子二；所述添加因子一包括以下终浓度的组分：透明质酸酶0.5-1mg/mL，EDTA0.1-0.5mg/mL，盐酸0.02-0.05mol/L；所述添加因子二包括以下终浓度的组分：wst-8 0.08-0.2mg/mL，1-Methoxy PMS0.05-0.3mg/mL，钙盐0.1-0.5mg/mL；所述添加因子一和所述添加因子二的溶剂均为无菌水。

进一步地，所述添加因子一的制备及保存方法为：按照组分的终浓度配料，将透明质酸酶、EDTA和盐酸混合均匀并溶解后，0.22μm滤膜过滤，于-20℃保存。

进一步地，所述添加因子二的制备及保存方法为：按照组分的终浓度配料，将wst-8、1-Methoxy PMS、钙盐和无菌水混合均匀并溶解后，0.22μm滤膜过滤，于-20℃保存。

进一步地，所述钙盐包括氯化钙、硝酸钙、硫酸钙、磷酸钙中的至少一种。

优选地，所述钙盐为氯化钙。

第二个方面，本发明提供上述CCK8检测试剂盒在类器官药敏活力检测中的应用。

第三个方面，本发明提供一种类器官药敏活力检测方法，包括：

(1)将类器官样本接种于孔板中，培养48-72h后进行药物接触；

(2)加药96h后在孔板中加入添加因子一继续培养20～30min；

(3)继续在孔板中加入添加因子二培养2-4h，于450nm进行活力检测。

本发明提供了一种新的CCK8检测试剂盒及药敏检测方法，与传统CCK8检测方法相比，具有以下几个优点：。

1、本发明在类器官药敏实验上的反应时间短，更快速。

2、本发明在类器官药敏实验的准确性方面优于一般的CCK8药敏检测方法。

3、本发明在类器官药敏实验的重复性方面优于一般的CCK8药敏检测方法。

附图说明

图1为本发明实施例6的人肺癌类器官细胞活力随来那替尼药物浓度变化的曲线图。