[发明专利]基于飞行时间质谱平台的rooptag不对称多重PCR检测心血管疾病用药基因的方法

说明书

本发明公布了核酸质谱技术检测心血管疾病用药相关基因的核酸组合物、试剂盒和检测方法，涉及一种检测心血管疾病用药基因的试剂盒及检测方法，试剂盒包括11种基因17个突变位点的检测试剂，针对11种基因出现的异常的基因变异位点，设计每个位点的带Roop结构的扩增引物，无需繁琐的单碱基延伸及后续纯化等处理步骤，可以快速地完成上机前的样本预处理流程，进而进行质谱分析其特异性的产物，判定每一个位点的基因型，其检测特异性强、灵敏度高，可应用于科研、药物疗效研究、心血管疾病相关调查、以及心血管临床用药指导。

技术领域

本发明属于飞行时间质谱基因检测技术领域，涉及一种检测心血管疾病用药基因的试剂盒，具体涉及人类样本中心血管疾病用药相关的11种基因17个突变位点的检测。针对11种基因出现的异常的基因变异位点，设计每个位点的rooptag引物引物组合，通过不对称多重PCR，进而进行质谱分析其特异性的产物，判定每一个位点的基因型。本发明及应用涉及的技术领域是医学检验和核酸质谱技术。

背景技术

心血管疾病是全球人类健康的首要疾病负担，心血管疾病严重威胁着中国人的健康，我国心血管病的发病率和死亡率呈快速上升趋势，具有患者基数大，死亡率高的特点。根据《中国心血管病报告2019》数据，心血管病现患人数3.30亿，其中脑卒中1300万，冠心病1100万，肺原性心脏病500万，心力衰竭890万，风湿性心脏病250万，先天性心脏病200万，下肢动脉疾病4530万，高血压2.45亿。农村和城市心血管病分别占死因的45.91%和43.56%。

随着基因检测技术的普及，临床用药经逐渐发展为个性化用药阶段。药物基因组学正是通过研究不同基因型对药物药效和毒性的不同反应，进而为携带不同基因型的个体临床用药提供差异化指导。通过精准用药指导，可以降低患者不良心血管事件发生的风险，以期达到“精准医疗”、“个性化用药”、“合理用药”的目标。

高血压和心血管疾病是复杂疾病，由多个微效基因与环境因素长期相互作用所致。鉴定出与高血压和/或血压升高相关的易感基因和/或致病基因，在人群中筛选增加疾病风险的易感基因确定易感个体，将有助于高血压和心血管疾病事件(冠心病和脑卒中)的发病风险预测、新药开发、诊断和个体化治疗。

基因检测是诊断医学和分子生物学研究的重要工具在诸如以下方面起到重要的作用：病原体如真菌，细菌和病毒检测，遗传病筛查，疾病精准用药，肿瘤筛查，法医鉴定等各个领域。

国家卫生计生委印发的《医疗机构临床检验项目目录2013年版》中“五、临床分子生物学及细胞遗传学检目录下用药指导的分子生物学检验”推荐进行CYP2D6*10、CYP2C9*3、ADRB1(1165GC)、AGTR1(1166AC)、ACE(I/D)、CYP2C19、CYP2C9、VKORC1、MTHFR(C677T)以及APOE基因检测。

目前药物用药相关基因检测产品已有获批，考虑到临床上心血管疾病多伴有其他并发症，患者常有多药物联用的情况，但由于药物间的相互作用、患者自身情况等多方面因素的影响，易导致不良反应的发生。所以针对心血管常用药，基因检测能更有效地指导患者用药。

基因检测技术平台主要包括：Taqman 探针法、Sanger测序法、飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）分型、HRM（高分辨率熔解曲线）、杂交法、高通量测序等技术平台。其中，基于时间飞行质谱（MALDI-TOF）完成的核酸检测比如SNP检测准确率可达99.9%，除了准确性高、灵活性强、通量大、检测周期短等优势外，最有吸引力的应该还是它的性价比。以SNP为例，飞行时间质谱平台（MALDI-TOF）是国际通用的基因单核苷酸多态性（SNP）的研究平台，该方法凭借其科学性和准确性已经成为该领域的新标准。