[发明专利]一种表达冠状病毒受体结合域串联二聚体的重组副流感病毒5型载体

说明书

本发明公开一种表达冠状病毒Spike蛋白的受体结合域串联二聚体的重组副流感病毒5型载体，所述重组副流感病毒5型载体包含一种副流感病毒5型基因组，所述副流感病毒5型基因组包含冠状病毒Spike蛋白的受体结合域串联二聚体的基因序列。实验证明rPIV5‑tr‑RBD对2019‑nCoV冠状病毒具有优良的免疫保护效果。本发明具有重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种表达冠状病毒受体结合域串联二聚体的重组副流感病毒5型载体。

背景技术

新冠肺炎的临床症状包括发热、干咳、乏力等，患者可出现鼻塞、流涕、咽痛、结膜炎等多种症状，重症患者可出现呼吸困难、低氧血症，严重者可发展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克等甚至导致死亡。

疫苗接种是预防新冠病毒的最有效手段之一，目前各国已有多个研究机构进行新冠疫苗的制备，包括灭活疫苗，重组蛋白疫苗，重组腺病毒疫苗，mRNA疫苗以及病毒载体疫苗等。灭活疫苗可以有效地激发高水平的体液免疫，相对安全，但不能诱导细胞毒T淋巴细胞反应，不能够产生局部免疫反应；重组蛋白疫苗技术成熟，不良反应小，但生产速度较慢；重组腺病毒疫苗虽然免疫效果好，但可能会存在一定的不良反应，且人体内可能含有针对腺病毒载体的抗体，会影响疫苗效果；mRNA疫苗相对效果好，但存储运输条件相对较为苛刻，成本较高。

病毒载体疫苗具有多种优势，由于是活病毒载体，可在免疫动物体内进行复制，诱导较强的免疫反应；可通过自然感染，如滴鼻、喷雾等方式进行免疫；可产生体液免疫与细胞免疫，除了激发全身免疫反应外，还可激发局部免疫反应，如在呼吸道中产生sIgA抗体，发挥较强的免疫保护效果。目前，在新冠疫苗的研发过程中，已有多种病毒载体疫苗在研发过程中，并在动物模型中具有良好的免疫保护效果，如黄热病毒、痘病毒、新城疫病毒、水疱口炎病毒等。副流感病毒5型(PIV5)作为预防犬窝咳的疫苗在犬中应用已有数十年的历史，而且未被证实可引起任何其他动物包括人致病。

发明内容

本发明提供一种表达冠状病毒Spike蛋白的受体结合域串联二聚体(Tandemrepeat Receptor-binding domain,tr-RBD)的重组副流感病毒5型载体，

所述重组副流感病毒5型载体包含一种副流感病毒5型基因组，所述副流感病毒5型基因组包含冠状病毒Spike蛋白的受体结合域串联二聚体的基因序列。

可选的，所述冠状病毒为2019-nCoV。

可选的，所述副流感病毒5型基因组为：用序列甲替换一种副流感病毒5型基因组的小疏水蛋白基因核苷酸序列，所得；

所述序列甲为如下1)或2)或3)：

A)SEQ ID NO：1所示DNA分子；

B)在严格条件下与A)限定的DNA分子杂交且编码所述冠状病毒Spike蛋白的受体结合域串联二聚体的DNA序列；

C)与A)或B)限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同一性且编码所述冠状病毒Spike蛋白的受体结合域串联二聚体的DNA序列。

可选的，所述表达冠状病毒Spike蛋白的受体结合域串联二聚体的基因序列如SEQID：NO：1所示；所述表达冠状病毒Spike蛋白的受体结合域串联二聚体基因序列编码的蛋白的氨基酸序列为SEQ ID：NO：2所示。

可选的，所述副流感病毒5型基因组为将SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列的第6303-6437位的核苷酸序列替换为SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。