[发明专利]一种表达冠状病毒受体结合域串联二聚体的重组副流感病毒5型载体

权利要求书

1.一种表达冠状病毒Spike蛋白的受体结合域串联二聚体的重组副流感病毒5型载体，其特征在于，所述重组副流感病毒5型载体包含一种副流感病毒5型基因组，所述副流感病毒5型基因组包含冠状病毒Spike蛋白的受体结合域串联二聚体的基因序列。

2.根据权利要求1所述的表达冠状病毒Spike蛋白的受体结合域串联二聚体的重组副流感病毒5型载体，其特征在于，所述副流感病毒5型基因组为：用序列甲替换一种副流感病毒5型基因组的小疏水蛋白基因核苷酸序列，所得；

所述序列甲为如下1)或2)或3)：

A)SEQ ID NO：1所示DNA分子；

B)在严格条件下与A)限定的DNA分子杂交且编码所述冠状病毒Spike蛋白的受体结合域串联二聚体的DNA序列；

C)与A)或B)限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同一性且编码所述冠状病毒Spike蛋白的受体结合域串联二聚体的DNA序列。

3.一种组合物，其特征在于，包括重组副流感病毒5型载体、表达辅助蛋白的辅助重组质粒—NP、辅助重组质粒—P和辅助重组质粒—L；所述表达辅助蛋白的辅助重组质粒—NP、辅助重组质粒—P和辅助重组质粒—L是将副流感病毒5型的NP、P和L蛋白的编码基因分别插入哺乳动物表达载体中，得到辅助重组质粒—NP、辅助重组质粒—P和辅助重组质粒—L。

4.一种在细胞中表达冠状病毒Spike蛋白的受体结合域串联二聚体的方法，其特征在于，该方法包括使该细胞与如权利要求1或2中所述的表达冠状病毒Spike蛋白的受体结合域串联二聚体的重组副流感病毒5型载体相接触。

5.一种表达冠状病毒Spike蛋白的受体结合域串联二聚体的重组副流感病毒5型载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将副流感病毒5型全基因组反转录得到的cDNA插入克隆载体中，得到重组质粒pPIV5；

2)用序列甲替换步骤1)中重组质粒pPIV5中副流感病毒5型的小疏水蛋白基因核苷酸序列；所述序列乙为如下1)或2)或3)：

A)SEQ ID NO：1所示DNA分子；

B)在严格条件下与A)限定的DNA分子杂交且编码所述冠状病毒Spike蛋白的受体结合域串联二聚体的DNA序列；

C)与A)或B)限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同一性且编码所述冠状病毒Spike蛋白的受体结合域串联二聚体的DNA序列。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述克隆载体为带有T7 RNA聚合酶启动子序列、带有丁肝核酶序列、T7 RNA聚合酶转录终止序列的克隆载体。

7.一种新型冠状病毒(2019-nCoV)疫苗的制备方法，其特征在于，所述疫苗的制备方法包括如下步骤：将权利要求1或2所述表达冠状病毒Spike蛋白的受体结合域串联二聚体的重组副流感病毒5型载体、表达辅助蛋白的辅助重组质粒—NP、辅助重组质粒—P和辅助重组质粒—L共转染宿主细胞；所述表达辅助蛋白的辅助重组质粒—NP、辅助重组质粒—P和辅助重组质粒—L是将副流感病毒5型的NP、P和L蛋白的编码基因分别插入哺乳动物表达载体中，得到辅助重组质粒—NP、辅助重组质粒—P和辅助重组质粒—L。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述宿主细胞为BSR-T7细胞，MDBK细胞,Vero细胞或BHK-21细胞。

9.权利要求7或8所述方法制备得到的疫苗。

10.权利要求1或2所述重组副流感病毒5型载体或权利要求5或6所述方法制备的重组副流感病毒5型载体在如下任一一种中的应用：

(1)制备提高动物体内针对冠状病毒2019-nCoV Spike蛋白抗体水平的产品中的应用；

(2)制备预防或辅助预防冠状病毒2019-nCoV引起的疾病产品中的应用。