[发明专利]一种超顺磁修饰中性粒细胞外泌体仿生囊泡药物递送生物制剂及其制备方法

说明书

本发明提供了一种超顺磁修饰中性粒细胞外泌体仿生囊泡药物递送生物制剂及其制备方法，属于工程化纳米囊泡载药系统技术领域。本发明所述制备方法制备得到的超顺磁修饰中性粒细胞外泌体仿生囊泡药物递送生物制剂，作用于肿瘤细胞株，发现超顺磁修饰中性粒细胞外泌体仿生囊泡药物递送生物制剂能够特异性靶向肿瘤细胞，诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤生长，显著延长小鼠生存时间，改善药物对癌症的治疗效率。

技术领域

本发明属于工程化纳米囊泡载药系统技术领域，具体涉及一种超顺磁修饰中性粒细胞外泌体仿生囊泡药物递送生物制剂及其制备方法。

背景技术

癌症是严重威胁人类健康的疾病，大多数癌症的诊断都处于中晚期，导致患者预后不佳。目前，化疗是治疗癌症的常用手段。然而，大多数药物对正常细胞有毒性作用，缺乏靶向性。因此，细胞外囊泡的出现为肿瘤的靶向治疗开辟了新前景。从天然细胞来源的纳米载体来看，细胞外囊泡具有较低的生物毒性，可以作为优良的纳米载体被设计成具有靶向抗肿瘤作用的复合物。迄今为止，已有诸多研究通过细胞外囊泡输送蛋白、RNA或其他小分子药物以达到治疗疾病的目的，但是仿生囊泡未曾在肿瘤领域进行过相关研究。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种超顺磁修饰中性粒细胞外泌体仿生囊泡药物递送生物制剂及其制备方法，所述超顺磁修饰中性粒细胞外泌体仿生囊泡药物递送生物制剂可特异性靶向癌细胞，从而抑制癌细胞增殖、延缓癌发生发展。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种超顺磁修饰中性粒细胞外泌体仿生囊泡药物递送生物制剂的制备方法，包括以下步骤：1)将外周血中性粒细胞与抗肿瘤药物共同培养，得摄取药物的中性粒细胞；

2)对所述摄取药物的中性粒细胞进行离心，重悬底部缓冲垫，得细胞悬液；

3)对所述细胞悬液进行连续物理挤压和梯度过滤，得中性粒细胞外泌体仿生囊泡包裹药物悬液；所述梯度过滤包括依次通过1μm、400nm和200nm聚碳酸酯过滤膜；

4)对所述中性粒细胞外泌体仿生囊泡包裹药物悬液离心后，重悬底部NNV-药物缓冲垫，得NNV-药物悬液；

5)将所述NNV-药物悬液与超顺磁材料混合后共孵育，对共孵育后的混合液进行磁分离，得超顺磁修饰中性粒细胞外泌体仿生囊泡药物递送生物制剂。

优选的，步骤1)每1×10⁶个所述外周血中性粒细胞与50μg的抗肿瘤药物共同培养。

优选的，步骤1)所述共同培养的温度为37℃，时间为12～24h。

优选的，步骤2)所述离心包括差速离心，所述差速离心的离心力为800g，离心时间为5min。

优选的，步骤3)所述物理挤压包括使用mini-extrader挤压器对所述细胞悬液进行11次连续的物理挤压。

优选的，步骤4)所述离心包括超速离心，所述超速离心的离心力为10000g，离心时间为80min。

优选的，步骤5)所述超顺磁材料包括SPION-Tf，所述SPION-Tf在所述NNV-药物悬液中的浓度为0.5mg/ml。

优选的，步骤5)所述共孵育的温度为4℃，时间为4h。

优选的，步骤5)所述磁分离包括利用钕磁铁进行磁分离，MF＝1T。

本发明还提供了利用上述制备方法制备得到的超顺磁修饰中性粒细胞外泌体仿生囊泡药物递送生物制剂。