[发明专利]FMR1基因CGG重复数及甲基化检测试剂盒和检测方法

说明书

本发明公开FMR1基因CGG重复数及甲基化检测试剂盒和检测方法，其中，该检测试剂盒包括限制性内切酶、磁珠以及捕获探针；所述限制性内切酶用以酶切样本的基因组DNA，所述磁珠连接有第一修饰基团，所述捕获探针连接有第二修饰基团，所述第二修饰基团用以连接所述第一修饰基团，以将所述磁珠和所述捕获探针偶联，偶联所述磁珠的所述捕获探针用以特异性结合酶切下来的DNA片段。本发明检测试剂盒和检测方法操作简便、判读准确，易于临床应用和推广。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，特别涉及FMR1基因CGG重复数及甲基化检测试剂盒和检测方法。

背景技术

FMR1基因位于X染色体上，长度为38kb。FMR1基因的5’端非翻译区包含CGG重复序列。CGG重复序列的重复数具有多态性，不同人之间的重复数可能存在差异。研究者根据CGG的重复数，将FMR1基因分为4种基因型，即野生型(CGG重复数45)、中间型(CGG重复数为45～54)、前突变型(CGG重复数为55～200)和全突变型(CGG重复数200)。正常人的CGG重复数在45以下。前突变携带者(男性居多)，有一定的可能性罹患脆性X相关震颤/共济失调综合征(Fragile X-associated tremor/ataxia syndrome，FXTAS)，女性有一定的可能性罹患FXPOI脆性X关联原发性卵巢功能不全(Fragile X-Associated Primary OvarianInsufficiency，FXPOI)。而对于全突变者，FMR1基因启动子上游250bp的CpG岛及附近的序列可发生甲基化，造成FMR1基因转录失活，使得FMRP无法表达，从而导致脆性X综合征(Fragile X Syndrome，FXS)的发病。由于CGG重复数在亲代传给后代中可能出现全突变，所以人群筛查可以找到前突变以及全突变的携带者，并进一步通过产前诊断方式来预防患儿的产生，对于优生优育具有十分重要的意义。

目前已有一些检测方法来检测FMR1基因5’非翻译区的CGG重复数及甲基化状态，主要包括Southern印记杂交法、常规PCR扩增法、甲基化特异性转换后进行PCR扩增和三碱基重复PCR等，但是以上检测方法的检测结果不够准确，临床应用和推广受限。

上述内容仅用于辅助理解发明的技术方案，并不代表承认上述内容是现有技术。

发明内容

本发明的主要目的是提出FMR1基因CGG重复数及甲基化检测试剂盒和检测方法，旨在解决现有检测方法的检测结果不够准确的技术问题。

为实现上述目的，第一方面，本发明提出一种FMR1基因CGG重复数及甲基化检测试剂盒，包括：

限制性内切酶，所述限制性内切酶用以酶切样本的基因组DNA；

磁珠，所述磁珠连接有第一修饰基团；以及

捕获探针，所述捕获探针连接有第二修饰基团，所述第二修饰基团用以连接所述第一修饰基团，以将所述磁珠和所述捕获探针偶联，偶联所述磁珠的所述捕获探针用以特异性结合酶切下来的DNA片段。

第二方面，本发明还提出一种FMR1基因CGG重复数及甲基化检测试剂盒，包括：

限制性内切酶，所述限制性内切酶用以酶切样本的基因组DNA；以及

偶联磁珠的捕获探针，所述偶联磁珠的捕获探针用以特异性结合酶切下来的DNA片段；

其中，所述磁珠连接有第一修饰基团，所述捕获探针连接有第二修饰基团，所述第一修饰基团连接所述第二修饰基团。

可选地，上述两种FMR1基因CGG重复数及甲基化检测试剂盒还包括：酶切反应液以及预杂交液。