[发明专利]一种心肌肌钙蛋白的寡核苷酸适配体及其应用

说明书

本发明公开了一种心肌肌钙蛋白的寡核苷酸适配体及其应用，适配体的序列为SEQ ID NO.1‑10之一，或适配体为与序列SEQ ID NO.1‑10之一功能等同的变体；适配体的应用为：制备包括适配体的药物、制备包括适配体的试剂盒、用于非诊断目的心肌肌钙蛋白的检测、用于心肌肌钙蛋白的分离纯化；该适配体适用于多种蛋白的寡核苷酸检测方法，具有更大的检测区间，消除了钩状效应，检测灵敏度更高。

技术领域

本发明涉及一种心肌肌钙蛋白的寡核苷酸适配体及其应用，属于分子生物学技术领域。

背景技术

肌钙蛋白(troponin，Tn)是横纹肌收缩的一种调节蛋白，是骨骼肌和心肌的结构蛋白，由TnT、TnC和TnI 3个亚基组成的复合体，与原肌球蛋白一起和肌动蛋白结合，90％位于横纹肌肌丝上，参与调节肌肉收缩。其中，TnT是原肌球蛋白结合亚基，调节肌钙蛋白复合物和细肌丝间的相互作用；TnC是钙离子结合亚基，对于钙离子依赖型的肌肉收缩起主要调节作用，而TnI是肌钙蛋白-肌球蛋白调节复合物中的抑制蛋白，起防止肌肉收缩的作用。当心肌缺血导致心肌损伤时，胞浆中游离的少量心肌肌钙蛋白I(cTnI)迅速释放进入血液循环，外周血中浓度迅速升高。随着心肌肌丝持续的降解，cTnI不断释放进入血液，于12-18h后达峰值，cTnI升高持续时间为4-10d。cTnI在骨骼肌中不表达，其生化性质决定了其作为心肌损伤指标的高度特异性和敏感性，特别是当心电图检测无异常时，可以用cTnI指标作为辅助判断。因此有必要针对cTnI的检测进行进一步的研究和改善。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的第一个目的在于提供一种心肌肌钙蛋白的寡核苷酸适配体，该适配体适用于多种蛋白的寡核苷酸检测方法，具有更大的检测区间，消除了钩状效应，检测灵敏度更高。

本发明的第二个目的在于提供一种上述心肌肌钙蛋白的寡核苷酸适配体的应用。

实现本发明的第一个目的可以通过采取如下技术方案达到：一种心肌肌钙蛋白的寡核苷酸适配体，适配体的序列为SEQ ID NO.1-10之一，或适配体为与序列SEQ ID NO.1-10之一功能等同的变体。

进一步地，心肌肌钙蛋白为心肌肌钙蛋白I。

实现本发明的第二个目的可以通过采取如下技术方案达到：一种心肌肌钙蛋白的寡核苷酸适配体的应用，制备包括适配体的药物。

实现本发明的第二个目的可以通过采取如下技术方案达到：制备包括适配体的试剂盒。

实现本发明的第二个目的可以通过采取如下技术方案达到：为将适配体用于非诊断目的心肌肌钙蛋白的检测。

实现本发明的第二个目的可以通过采取如下技术方案达到：为将适配体用于心肌肌钙蛋白的分离纯化。

进一步地，心肌肌钙蛋白的分离纯化包括：

封闭步骤：以封闭液封闭经孵育的样品；

结合步骤：在经封闭处理的样品中加入经生物素修饰的适配体，温育后除去液体，得到适配体和蛋白的结合物；

洗涤步骤：将结合物进行洗涤。

进一步地，心肌肌钙蛋白的分离纯化包括：

封闭步骤：在链霉亲和素中加入经生物素修饰的适配体，温育后除去液体，以封闭液封闭适配体；

结合步骤：在经封闭处理的适配体中加入样品进行孵育，再加入经地高辛修饰的适配体进行温育，得到适配体和蛋白的结合物；

洗涤步骤：将结合物进行洗涤。

进一步地，心肌肌钙蛋白的分离纯化包括：

封闭步骤：在链霉亲和素中加入经生物素修饰的适配体，温育后除去液体，以封闭液封闭适配体；