[发明专利]一种液质联用定量检测污泥中类活性植物生长激素的方法

权利要求书

1.一种液质联用定量检测污泥中类活性植物生长激素的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

（1）污泥样品收集，冷冻干燥后低温保存；

（2）目标物萃取：准确称取污泥样品，加萃取剂、振荡涡旋、超声、离心，旋蒸后剩余液体用SAX-HLB串联固相萃取柱净化；

具体操作步骤为：

（2-1）准确称取样品，加入EDTA二钠，用乙腈-磷酸盐缓冲溶液混合，涡旋并超声；

（2-2）离心后，上清液移入旋转蒸发仪旋蒸，使乙腈含量小于5%；

（2-3）剩余液体用SAX-HLB串联固相萃取柱净化，所用的淋洗活化液是一级水，淋洗液为甲醇，氮吹后以甲醇-水溶液复溶；

（3）采用液相色谱富集类活性植物生长激素目标物、排除干扰物；液相色谱参数为：C18柱型号为ACQUITY UPLC BEH 1.7 µm，流动相溶液为体积比为25/75的乙腈和0.1%乙酸混合液；

（4）将处理后的样品采用两级质谱定量分析，定量检测污泥中类活性植物生长激素，目标物吲哚乙酸检出限为0.001 µg/ml，信噪比为9.56，对羟基苯乙酸的检出限为0.01 µg/ml，信噪比为19.7，吲哚乙酸和羟基苯乙酸的加标回收率分别达到90-120%和50-75%。

2.根据权利要求1所述的一种液质联用定量检测污泥中类活性植物生长激素的方法，其特征在于，步骤（1）中所述的污泥样品在冷冻干燥后置于2-4℃避光保存。

3.根据权利要求1所述的一种液质联用定量检测污泥中类活性植物生长激素的方法，其特征在于，步骤（2-1）所述乙腈-磷酸盐缓冲溶液的pH=2.5-3.5；所述涡旋的时间为1-3min。

4.根据权利要求1所述的一种液质联用定量检测污泥中类活性植物生长激素的方法，其特征在于，步骤（2-2）所述的离心的转速为3500-4500 rpm，时间为8-12 min；所述旋蒸的温度为38-42℃，压力为0.08-0.09 MPa。

5.根据权利要求1所述的一种液质联用定量检测污泥中类活性植物生长激素的方法，其特征在于，所述的污泥样品、EDTA二钠、旋蒸剩余液体和复溶液体的质量体积比为2 g:(0.3-0.5) g: (0.9-1.1) ml: 0.5 ml。

6.根据权利要求5所述的一种液质联用定量检测污泥中类活性植物生长激素的方法，其特征在于，所述的污泥样品、EDTA二钠、旋蒸剩余液体和复溶液体的质量体积比为2 g:0.4 g: 1 ml: 0.5 ml。

7.根据权利要求1所述的一种液质联用定量检测污泥中类活性植物生长激素的方法，其特征在于，步骤（3）中所述的液相色谱参数为：样进样量2 μl，柱温35℃，流动相流速0.4mL/min，等度洗脱5 min。

8.根据权利要求1所述的一种液质联用定量检测污泥中类活性植物生长激素的方法，其特征在于，步骤（4）中所述的两级质谱定量分析条件包括保留时间，监测离子对(m/z)，锥孔电压(V)和碰撞能(eV)，具体为：

保留时间：对羟基苯乙酸0.5-0.6 min，吲哚乙酸1.2-1.3 min；

锥孔电压：对羟基苯乙酸为18 V，吲哚乙酸为24 V；

监测离子对：羟基苯乙酸监测的母离子的质荷比(m/z)为151，二级质谱的特征离子质荷比(m/z)为107；吲哚乙酸监测的母离子的质荷比(m/z)为176，二级质谱的特征离子质荷比(m/z)为103和130；

碰撞能：羟基苯乙酸为10 eV，吲哚乙酸监测离子对为m/z=176＞103时碰撞能为30 eV，吲哚乙酸监测离子对为m/z=176＞130时碰撞能为16 eV。