[发明专利]一种用于蒽环类药物用药指导的多重基因检测试剂盒

权利要求书

1.一种用于蒽环类药物用药指导的多重基因检测试剂盒，其特征在于，包括PCR反应液、阳性对照品、超纯水、纯化液、荧光标记测序反应液、二次纯化液以及以及定性检测与蒽环类药物代谢相关基因的若干个SNP位点PCR引物组合物。

2.根据权利要求1所述的一种用于蒽环类药物用药指导的多重基因检测试剂盒，其特征在于，所述PCR引物组合物包括定性检测与蒽环类药物代谢相关基因的八个SNP位点的引物组合物。

3.根据权利要求2所述的一种用于蒽环类药物用药指导的多重基因检测试剂盒，其特征在于，所述SNP位点包括如下：AKR1A1 rs2088102和rs3014216，CBR1 rs20572和rs9024，ABCG2 rs2231142和rs2231137，SLC22A16 rs6907567和rs714368。

4.根据权利要求2所述的一种用于蒽环类药物用药指导的多重基因检测试剂盒，其特征在于，所述八个SNP位点的引物组合物包括SEQ ID NO.1-A～SEQ ID NO.8-A以及SEQ IDNO.1-B～SEQ ID NO.8-B；如下表所示：

5.一种用于蒽环类药物用药指导的多重基因检测方法，其特征在于，通过在蒽环类药物摄入、代谢、排出的三个环节，利用Sanger测序法检测蒽环类药物代谢及转运途径的四个候选基因的八个SNP位点，从而为预测含蒽环类药物化疗致乳腺癌患者发生骨髓抑制的概率和程度，指导蒽环类药物用药提供依据；具体包括如下步骤：

S1：PCR产物获取，以待测的基因组DNA为模板，通过聚合酶联反应对若干个SNP位点进行PCR扩增；

S2：PCR产物纯化，将10μL纯化液加入上述PCR产物，然后将PCR管放置在PCR仪上，设定反应条件，37℃40min；85℃5min；4℃维持；

S3：荧光标记测序产物获取，以步骤2中纯化的PCR产物为模板，通过循环测序法对PCR产物中个碱基进行荧光标记；

S4：荧光标记测序产物纯化，使用二次纯化反应液对步骤3中的测序产物进行纯化，然后使用基因分析仪进行检测即可。

6.根据权利要求5所述的多重基因检测检测方法，其特征在于，所述S4中纯化步骤如下：循环测序完成后，先对96孔的反应板进行短时离心，以1000g离心1min；然后向反应板的每一个微孔中加入55μL的二次纯化反应液；再使用热封或透明粘性盖膜密封反应板；再将反应板固定在振荡器上，以1000g振荡20min；然后使用带吊篮的离心机离心，以1000g离心2min；最后将反应板放入基因分析仪中，进行毛细管电泳检测。

7.根据权利要求6所述的多重基因检测方法，其特征在于，当S1、PCR产物获取，以待测的基因组DNA为模板，通过聚合酶联反应对8个SNP位点进行PCR扩增；所述PCR反应体系组成包括8μL的PCR反应液、1μL的基因组DNA以及1μL的SEQ ID NO.1-A～SEQ ID NO.8-A中任一一种。

8.根据权利要求7所述的多重基因检测方法，其特征在于，所述循环测序反应体系组成包括：5μL的荧光标记测序反应液、4μL的PCR产物以及1μL的SEQ ID NO.1-B～SEQ ID NO.8-B中任一一种。