[发明专利]一种负载小檗碱和多柔比星的牛血清白蛋白-叶酸改性壳聚糖纳米载药系统及其制备方法

说明书

本发明涉及多糖技术领域，尤其涉及一种负载小檗碱和多柔比星的牛血清白蛋白‑叶酸改性壳聚糖纳米载药系统及其制备方法。在同一纳米载药系统中包裹了小檗碱和多柔比星两种药物，所得纳米载药系统既具有小檗碱的抗炎作用，也具有多柔比星的抗肿瘤作用，两种药物的综合作用下，既能够有效地杀死肿瘤细胞，同时能够改善肿瘤细胞周围的炎症环境，防止肿瘤的转移和复发。本发明制备的纳米载药系统对肿瘤细胞具有较好的抑制率。

技术领域

本发明涉及多糖技术领域，尤其涉及一种负载小檗碱和多柔比星的牛血清白蛋白-叶酸改性壳聚糖纳米载药系统及其制备方法。

背景技术

盐酸多柔比星是上市多年的抗肿瘤药物，对急性白血病、肺癌、肝癌、乳腺癌、淋巴癌、前列腺癌、膀胱癌等均具有治疗作用，应用广泛。然而，盐酸多柔比星具有较大的毒副作用，包括：明显的骨髓抑制作用、引起消化道的炎症反应、易导致心衰、脱发等，个别患者还会出现过敏、结膜炎、肝功能异常、发热等症状。由于其较大的毒副作用，研究者们一直致力于开发高效的药物递送系统，使其靶向肿瘤细胞，减少对正常组织细胞的毒性。

壳聚糖是一种天然高分子多糖，具有无毒、可生物降解、抗菌等作用，广泛用于制备各种纳米载体，而且可以在壳聚糖上进行结构修饰，提高其载药效率，如中国专利CN102225051A公开的一种叶酸-羧甲基壳聚糖修饰pH敏感多柔比星纳米脂质体及其制备方法，该叶酸-羧甲基壳聚糖修饰pH敏感多柔比星纳米脂质体由多柔比星、磷脂、胆固醇、维生素E、叶酸-羧甲基壳聚糖等组成，具有pH敏感性、肿瘤靶向性以及长循环主动靶向给药功能。

但是壳聚糖溶解性较差，不易制备各种微囊载体。牛血清白蛋白是药物递送系统中常用的蛋白质载体，具有无毒、可降解、无免疫原性、易于给药注射等多种优点，但是其载药效率一般。

发明内容

本发明的目的是解决现有技术中的问题，提供一种能够充分发挥壳聚糖载药效率高和牛血清白蛋白无免疫原性、易于给药注射优点的负载小檗碱和多柔比星的牛血清白蛋白-叶酸改性壳聚糖纳米载药系统及其制备方法。

本发明的技术方案是：

一种负载小檗碱和多柔比星的牛血清白蛋白-叶酸改性壳聚糖纳米载药系统的制备方法，包括以下步骤：

⑴叶酸改性壳聚糖的制备：将叶酸加入到溶剂一中，搅拌，加入缩合剂和N-羟基琥珀酰亚胺，搅拌0.5~1.5小时，加入壳聚糖，升温至40~60℃，搅拌12~36小时，混合液用分子量为5000的透析袋透析72~80小时，冻干得叶酸改性壳聚糖；

⑵负载小檗碱和多柔比星的牛血清白蛋白-叶酸改性壳聚糖纳米载药系统的制备：取步骤⑴制备的叶酸改性壳聚糖和氧化石墨烯，加入到水中，超声20~40分钟，控制温度在15~25℃，搅拌条件下滴加入小檗碱和多柔比星的混合液，0.5~1小时滴加完毕，滴加完毕后超声5~10分钟，加入牛血清白蛋白，升温至30~50℃，搅拌3~6小时，反应液用分子量为5000的透析袋透析72~80小时，冻干得负载小檗碱和多柔比星的牛血清白蛋白-叶酸改性壳聚糖纳米载药系统；

所述溶剂一为二甲亚砜或水；

所述缩合剂为二环己基碳二亚胺或1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；

所述小檗碱和多柔比星的混合液按照如下方法制备：将0.05~0.1份小檗碱和0.04~0.08份多柔比星溶解在5~15份二氯甲烷甲醇混合液中，其中二氯甲烷、甲醇的体积比为2~4：1；

其中叶酸、溶剂一、缩合剂、N-羟基琥珀酰亚胺、壳聚糖、氧化石墨烯、水、小檗碱和多柔比星的混合液、牛血清白蛋白的质量比为0.1~0.5：100~200：0.2~0.3：0.12~0.25：1~2：0.05~0.2：100~200：5~15：0.6~1.2。

优选的，所述溶剂一为二甲亚砜。

优选的，所述缩合剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。

优选的，所述壳聚糖平均分子量20万，脱乙酰度大于90%。