[发明专利]高热稳定性高活性异丁香酚单加氧酶突变体及其应用有效
| 申请号： | 202110315426.6 | 申请日： | 2021-03-24 |
| 公开（公告）号： | CN113151201B | 公开（公告）日： | 2022-12-16 |
| 发明（设计）人： | 徐毅;陆馨怡;马宝娣;王倩;吴小梅;张磊;刘胜利 | 申请（专利权）人： | 上海应用技术大学 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12P7/24;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海科盛知识产权代理有限公司 31225 | 代理人： | 顾艳哲 |
| 地址： | 201418 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 高热 稳定性 活性 丁香 酚单加氧酶 突变体 及其 应用 | ||
1. 一种高热稳定性高活性异丁香酚单加氧酶突变体，其特征在于，在SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的基础上，具有选自第83位、第95位或第273位中的至少一个突变；当第83位突变时，第83位的赖氨酸K突变为精氨酸R，当第95位突变时，第95位的赖氨酸K突变为精氨酸R，当第273位突变时，第273位的亮氨酸L突变为苯丙氨酸F。
2.根据权利要求1所述的高热稳定性高活性异丁香酚单加氧酶突变体，其特征在于，对如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列中的第83位的赖氨酸K、第95位的赖氨酸K、第273位的亮氨酸L分别突变为精氨酸R、精氨酸R、苯丙氨酸F。
3.一种编码如权利要求1-2任一项所述的高热稳定性高活性异丁香酚单加氧酶突变体的基因。
4.获得如权利要求1所述的高热稳定性高活性异丁香酚单加氧酶突变体的方法，其特征在于，以质粒pET21a-IEM为模板，设计引物，通过PCR获得编码突变体的基因与质粒，以大肠杆菌为宿主表达异丁香酚单加氧酶突变体。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，具体为，以质粒pET21a-IEM为模板，设计引物，通过PCR获得编码突变体的重组质粒，将含有重组质粒的大肠杆菌种子液接种到发酵培养基中，在25℃，200rpm条件下发酵时间为12h；所述发酵培养基组成为：Na2HPO4 7g/L，KH2PO4 3g/L，酵母浸粉10g/L，NaCl 0.5g/L，葡萄糖14g/L，pH 7.0；IPTG诱导浓度为0.1mM。
6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于，以大肠杆菌为宿主、pET21a为载体，表达异丁香酚单加氧酶突变体。
7.一种编码如权利要求1-2任一项所述的高热稳定性高活性异丁香酚单加氧酶突变体的应用，其特征在于，以异丁香酚为底物制备香兰素。
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