[发明专利]一种人脐带组织冷冻储存方法

说明书

本发明公开了一种人脐带组织冷冻储存方法包括以下步骤：将新鲜脐带组织样本在无菌条件下转移到无菌收集瓶内并密封，不添加任何试剂，于冷藏条件下进行运送；将人脐带组织传入生物安全柜中；加入含双抗的DPBS溶液浸泡；将人脐带组织剪切成若干脐带组织段；清洗消毒，去除血水；沿横截面纵向剪开；将脐带剪碎成组织块，将组织块分组放入到冻存管中，加入一定量的无血清冻存液，4℃预冷；将预冷的组织样本，快速转移至程序降温仪内的冻存管管架内；将冻存管移入深低温冷冻储存器内长期储存。本发明脐带组织样本完整性高，建立了适应性的程序降温程序进行精确有效控制，组织样本缓慢冷冻过程活性及完整性损伤控制效果好，标准化程度高。

技术领域

本发明属于生物样本存储技术领域，涉及一种人脐带组织冷冻储存方法。

背景技术

间充质干细胞(MSCs)是一种具备自我更新、多项分化潜力的多能干细胞。近年来，MSCs在组织再生医学及免疫调节等方面临床研究应用快速提升，同时，其临床安全性及有效性不断得到验证，取得了鼓舞人心的进展，MSCs未来临床应用前景广阔。人MSCs广泛存在于多个人体组织中，如脂肪、牙齿、皮肤、脐带等等。其中脐带作为MSCs的来源有着显著的优势，如分离效率高、易于采集以及来源广泛等。

然而脐带组织采集后的冷藏保存期短，直接分离培养MSCs是一种劳动密集型的耗时工作过程，需长时间占用技术作业人员、仪器设备和洁净作业空间，大规模开展需要大量人员、仪器设备及作业空间。因此传统方法只适合样本量较少的情况下可行，在脐带组织样本数量大且集中时无法快速处理，脐带组织处理延迟，会严重影响其活性及完整性，丧失其分离培养获得MSCs的能力，造成脐带组织丢弃浪费。

而脐带组织采集后，直接冻存组织，在未来需要时提取复苏再进行MSCs分离培养的作业方式，更符合成本效益。此外，研究已经证实，除了MSCs以外，能够从人脐带组织分离获得的干细胞还有上皮祖细胞以及内皮祖细胞，这两种人脐带来源的干细胞同样拥有重要的临床应用潜力。因此，直接冻存人脐带组织能最大化的发挥脐带组织作为种子细胞来源的临床应用价值，但截至目前，人脐带组织冻存缺乏实用高效的技术方法，主要存在以下不足：

①冻存结构区域单一(多选择华通氏胶)破坏了脐带组织结构完整性，影响脐带样本未来的临床应用潜力；②运送过程多采用含抗生素运送液进行运送，脐带组织长时间暴露于抗生素溶液中，组织活性大幅降低；

③前处理作业过程剥离华通氏胶作业复杂，处理作业消耗时间长，导致整体处理作业延长，样本活性降低；

④组织样本缓慢冻存过程缺乏有效控制，降温程序控制单一且控制精度低(多使用程序降温盒或者单一降温速率进行冻存，降温速度多为1℃/min左右)，组织样本缓慢冷冻过程活性及完整性损伤控制效果差，缺乏适当的降温程序；

⑤冻存技术方案未充分考虑未来临床应用的安全性要求，所使用的关键试剂冻存液的成分复杂且可能含有血清成分；

⑥人脐带组织冻存标准化程度低，过程控制不足，以致技术适应及稳定性差，无法有效保持脐带组织的活性及完整性；

基于以上原因，人脐带组织样本的存储效果及后续应用的安全性存在巨大挑战，很可能导致人脐带组织样本冻存复苏组织活性或安全性难以满足临床应用要求，严重影响组织样本的应用潜力，造成样本资源及成本浪费，因此新的高效的人脐带组织冻存技术亟待开发。

发明内容

本发明的目的，就是为了解决上述问题而提供了一种人脐带组织冷冻储存方法；可以保障人脐带组织样本存冷冻储效果满足临床复苏应用要求，为建立临床级人脐带组织样本存储提供技术解决办法。

本发明的目的是这样实现的：

本发明的一种人脐带组织冷冻储存方法包括以下步骤：

S1:人脐带组织样本运送；