[发明专利]血清4型禽腺病毒反向遗传疫苗株rR188I及其构建方法和应用

说明书

本发明公开了一株血清4型禽腺病毒反向遗传疫苗株rR188I及其构建方法和应用。本发明的疫苗株rR188I是在我国FAdV‑4新近分离株HLJFAd15基因组全长的感染性克隆粘粒Fos‑rFAdV4基础上将Hexon基因的第563位碱基由G突变为A，即编码的第188位氨基酸由R突变为I，获得感染性克隆粘粒Fos‑rR188I，然后利用Fos‑rR188I成功拯救出疫苗株rR188I。致病性实验显示rR188I对SPF鸡无致病性(突变之前具有100％的死亡率)。免疫保护实验证明，接种rR188I的SPF鸡可以完全抵抗FAdV‑4强毒株的攻毒感染，证明rR188I具有非常好的免疫原性，可以作为疫苗候选毒株，同时致弱毒株大大降低了强毒株生物安全的隐患。

技术领域

本发明涉及一株血清4型禽腺病毒疫苗株及其构建方法和应用，特别涉及一株通过点突变获得的血清4型禽腺病毒反向遗传疫苗株及其构建方法和应用。本发明属于医药技术领域。

背景技术

禽腺病毒(FAdVs)在全世界广泛流行，流行毒株主要有FAdV-4、FAdV-11、FAdV-1、FAdV-8a、FAdV-8b等血清型，给家禽养殖业造成了严重的经济损失。FAdVs感染最早于1987年在巴基斯坦的安卡拉地区发现，因此该病也称为“安卡拉病”，之后在中国、日本、韩国、印度、美国、加拿大等不同国家和地区都有相关的报道。FAdVs根据群特异性抗原的不同可以分为3个群：I群包括传统的从鸡、火鸡、鹅及其他禽类获得的腺病毒；II群主要是和火鸡出血性肠炎、大理石脾病相关的腺病毒；III群主要是与减蛋综合征病毒有关的一类病毒。I群腺病毒根据分子结构可以进一步分为5个种(A-E)，根据血清型不同分为12个血清型(1-7、8a、8b、9-11)。I群禽腺病毒致病性差异很大，致病毒株主要导致心包积液、包涵体肝炎、肌胃糜烂等症状；非致病毒株可以在家禽体内持续感染复制，具有开发疫苗载体的潜力。

2015年06月以来，由高致病性血清4型禽腺病毒(FAdV-4)感染引起的禽心包积液-包涵体肝炎综合征(HHS)在我国的江苏、山东、黑龙江、湖北等省份突发流行，死亡率高达30％-100％，给我国家禽养殖产业造成巨大的经济损失，对我国家禽绿色健康养殖构成巨大的威胁和挑战。FAdV-4感染的家禽出现急性死亡，死亡高峰集中在1周之内，死亡家禽出现典型的心包积液以及包涵体肝炎症状。此外，FAdV-4感染能够导致宿主的免疫抑制，由此导致的免疫失败、继发感染、混合感染进一步加剧了HPS的危害。FAdV-4的感染宿主非常广泛，不仅感染规模养殖的蛋鸡、肉鸡、肉种鸡，也可以感染鸭、鹅及多种野生鸟类，FAdV-4感染宿主多样性增加了跨宿主传播的潜在风险，给该病的科学防控增加了难度。此外，FAdV-4不仅可以通过呼吸道等途径进行水平传播，还可以通过鸡胚进行垂直传播，对鸡胚源兽用疫苗的生产构成威胁，部分人用疫苗也是通过鸡胚进行生产，这也给人类公共卫生安全构成一定的潜在威胁。

因此，开发安全有效的疫苗是防控HPS的关键。关于疫苗研发已经有很多相关报道，但是之前的疫苗成分研究主要集中在两个方面：一个是强毒灭活作为免疫原，二是表达FAdV-4的某一个蛋白作为亚单位疫苗。本发明发明人对我国新发流行的高致病性FAdV-4进行了持续的流行病学监测和遗传进化分析，分离鉴定了蛋鸡分离株HLJFAd15，并首次利用Fosmid系统建立了FAdV-4的反向遗传操作系统，利用该系统将强毒株的hexon基因进行替换拯救获得rR188I毒株，致病性实验显示rR188I对SPF鸡无致病性(突变之前具有100％的死亡率)。免疫保护实验证明，接种rR188I的SPF鸡可以完全抵抗FAdV-4强毒株的攻毒感染，证明rR188I具有非常好的免疫原性，可以作为疫苗候选毒株，同时致弱毒株大大降低了强毒株生物安全的隐患。

发明内容

本发明的目的在于提供一种血清4型禽腺病毒反向遗传疫苗株及其构建方法和应用。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：