[发明专利]干细胞静脉注射剂及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及干细胞技术领域，尤其涉及干细胞静脉注射剂及其制备方法与应用。本发明提供的干细胞静脉注射剂中间充质干细胞的直径为8～12微米，并且通过培养基的驯化使得移植的细胞结团率低，低表达黏附因子ICAM‑1，因此降低了间充质干细胞被肺部毛细管的截留细胞量，从而促进更多的间充质干细胞达到靶器官进行组织修复治疗。此外，研究发现本发明方法制备的细胞体外增殖能力要比常规培养的细胞增殖快，降低了细胞的体外制备时间，提高了生物制剂的生产效率，且更有利于提高疗效。

技术领域

本发明涉及干细胞技术领域，尤其涉及干细胞静脉注射剂及其制备方法与应用。

背景技术

人间充质干细胞(human Mesenchymal Stem Cells,hMSCs)是一类特殊的间充质干细胞，其具有组织修复、免疫调节和多向分化的潜能，已广泛应用于多种疾病的临床治疗研究。例如，临床前和临床试验均表明间充质干细胞具有修复和治疗视网膜变性疾病的作用，而视网膜变性疾病作为一种难治性眼部疾病，其病因是视网膜光感受器细胞的损伤或退行性病变，此前临床上尚无有效治疗方式。

目前全球有十余种干细胞产品上市，其中半数以上均为间充质干细胞产品，由此可见间充质干细胞作为一种重要的疾病治疗新药，备受全世界关注。目前间充质干细胞的移植方式主要是全身移植和局部移植，全身移植主要是静脉注射和动脉注射，局部移植主要是靶器官移植注射。静脉注射由于操作方便，创伤性小的植入方式，因此成为最常用的移植方式。

但研究表明体外扩增的hMSC静脉注射1小时后，约50％～60％的间充质干细胞被肺组织截留，并且截留在肺部组织中的hMSC不久便死亡，这种情况造成静脉输入的间充质干细胞到达靶器官的数量极少，到达肝、肾、胃肠和淋巴结细胞不足1％，能到达位于循环末梢的组织的间充质干细胞数量就更少，极大影响间充质干细胞的治疗效果。

因此，减少体外注射间充质干细胞的肺部截留，促进更多的间充质干细胞到达靶器官，发挥组织修复的作用，仍是本领域亟待解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供肺部截留低的干细胞静脉注射剂及其制备方法与应用。

本发明提供的干细胞静脉注射剂，由间充质干细胞、白蛋白和生理盐水组成；其中，间充质干细胞的粒径为8μm～12μm。

本发明所述的干细胞静脉注射液中，间充质干细胞的密度为1.0×10⁶cells/ml；白蛋白的质量分数为1％～5％。

一些实施例中，本发明所述的干细胞静脉注射液中，间充质干细胞的密度为1.0×10⁶cells/ml；白蛋白的质量分数为3％。

本发明中，所述间充质干细胞为脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、牙髓间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、胚胎干细胞诱导分化而来的间充质干细胞和/或多能诱导干细胞诱导分化而来的间充质干细胞。

一些具体实施例中，所述间充质干细胞为脐带间充质干细胞。

本发明实施例中，所述脐带间充质干细胞的制备方法包括：

将脐带间充质干细胞以含有1wt％BSA的α-MEM培养液重悬后，经过滤取直径为8～12μm的细胞；

将直径为8～12μm的细胞以培养基A培养，然后以培养基B培养；

其中，培养基A包括98vol％α-MEM、2vol％血清替代物和2～20μg/mlmethimazole。

培养基B包括95vol％α-MEM、5vol％血清替代物和2～20μg/ml methimazole。

一些实施例中，培养基A包括98vol％α-MEM、2vol％血清替代物和20μg/mlmethimazole