[发明专利]一种用于检测β-乳球蛋白的胶体金免疫层析试纸及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于检测β-乳球蛋白的胶体金免疫层析试纸，其特征在于，所述试纸包括金标垫、样品垫、吸水垫和NC膜，所述金标垫中含有胶体金标记的鼠抗牛β-乳球蛋白单克隆抗体，所述金标记的鼠抗牛β-乳球蛋白单克隆抗体以鼠抗牛β-乳球蛋白单克隆抗体量记为0.25μg/cm²，所述NC膜上设置有T检测线，所述T检测线上鼠抗牛β-乳球蛋白单克隆抗体以牛β-乳球蛋白单克隆抗体量计为0.00625μg/cm²。

2.一种用于检测β-乳球蛋白的胶体金免疫层析试纸，其特征在于，所述NC膜上还设置有C质控线，所述C质控线上含有羊抗鼠IgG的抗体，所述C质控线上羊抗鼠IgG的抗体以羊抗鼠IgG抗体量计为0.00625μg/cm²。

3.一种权利要求1或2所述的胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，包括：

S1：将胶体金标记的鼠抗牛β-乳球蛋白单克隆抗体溶液喷涂至金标垫上；

S2：将鼠抗牛β-乳球蛋白单克隆抗体溶液喷涂至NC膜的T检测线上；

S3：将羊抗鼠IgG抗体溶液喷涂至NC膜的C质控线上；

S4：将金标垫、样品垫、吸水垫、NC膜组装成试纸；

所述金标垫上胶体金标记的鼠抗牛β-乳球蛋白单克隆抗体以鼠抗牛β-乳球蛋白单克隆抗体量记为0.25μg/cm²；

所述T检测线上鼠抗牛β-乳球蛋白单克隆抗体以牛β-乳球蛋白单克隆抗体量计为0.00625μg/cm²；

所述C质控线上羊抗鼠IgG的抗体以羊抗鼠IgG抗体量计为0.00625μg/cm²。

4.根据权利要求3所述的胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，包括：

S5：鼠抗牛β-乳球蛋白单克隆抗体的制备及纯化；

S6：胶体金制备，鼠抗牛β-乳球蛋白单克隆抗体胶体金标记及纯化；

S7：将胶体金标记的鼠抗牛β-乳球蛋白单克隆抗体溶液喷涂至金标垫上，所述金标垫上胶体金标记的鼠抗牛β-乳球蛋白单克隆抗体以鼠抗牛β-乳球蛋白单克隆抗体量记为0.25μg/cm²；

S8：用PBS缓冲液制备鼠抗牛β-乳球蛋白单克隆抗体溶液，并采用喷金点膜仪喷涂至NC膜的T检测线上；所述T检测线上鼠抗牛β-乳球蛋白单克隆抗体以牛β-乳球蛋白单克隆抗体量计为0.00625μg/cm²；

S9：用PBS缓冲液制备羊抗鼠IgG抗体溶液，并采用喷金点膜仪喷涂至NC膜的C质控线上；所述C质控线上羊抗鼠IgG的抗体以羊抗鼠IgG抗体量计为0.00625μg/cm²；

S10：将金标垫、样品垫、吸水垫和NC膜组装成试纸。

5.根据权利要求4所述的胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，所述步骤S5中鼠抗牛β-乳球蛋白单克隆抗体的制备及纯化过程：

S11：动物免疫：用牛乳β-LG蛋白作为抗原免疫雌性BALB/c小鼠，免疫剂量为30μg/只，第14天，注射等量量福氏不完全佐剂乳化的抗原，第21天，进行常规免疫；30天后，剂量减半，进行加强免疫一次；

S12：细胞融合：将S11中得到的免疫小鼠脾细胞和NS-1骨髓瘤细胞以5:1的比例混合，在50% PEG作用下进行融合，将融合后的细胞悬液于37℃、5%的CO₂内培养；

S13：杂交瘤细胞筛选：融合5天后，加入HAT培养基，10天后交换HT培养基，一段时间后用间接ELISA法进行抗体筛选，筛选出对牛乳β-乳球蛋白特异性强，对羊β-乳球蛋白亲和性低的单克隆抗体并进行单克隆抗体细胞株的鉴定；

S14：将阳性的杂交瘤细胞用有限稀释法进行亚克隆，扩大培养杂交瘤细胞并进行纯化，获得单克隆抗体，所述单克隆抗体的效价＞1:204800，置于-80℃保存。