[发明专利]逆转录酶突变体及其应用

说明书

本发明提供一种MMLV逆转录酶突变体，在野生型MMLV逆转录酶氨基酸序列（如SEQ ID No.1序列所示）中进行七个氨基酸位点的突变，氨基酸突变位点为：R205H；V288T；L304K；G525D；S526D；E531G；E574G。该突变体可以降低MMLV逆转录酶对Taq DNA聚合酶的抑制作用，大大提高了一步法RT‑qPCR的灵敏度。

技术领域

本发明专利涉及逆转录酶突变体及其应用，属于生物技术领域。

背景技术

野生型的MMLV逆转录酶会和Taq DNA聚合酶相互作用，抑制Taq DNA聚合酶活性，从而大大降低了一步法RT-qPCR扩增效率。亟需一种可以提升检测灵敏度的MMLV逆转录酶，以满足RNA病毒快速检测的临床需求。

发明内容

本发明的目的是提供一种MMLV逆转录酶突变体，在野生型MMLV逆转录酶氨基酸序列（如SEQ ID No.1序列所示）中进行七个氨基酸位点的突变，氨基酸突变位点为：R205H、V288T、L304K、G525D、S526D、E531G和E574G。该突变体可以降低MMLV逆转录酶对Taq DNA聚合酶的抑制作用，大大提高了一步法RT-qPCR的灵敏度。

本发明的另一目的是提供上述的逆转录酶突变体在进行逆转录反应中的应用，以及在提高一步法RT-qPCR扩增效率中的应用。

其中在提高一步法RT-qPCR扩增效率中的应用的步骤为：

（1）合成待测RNA病毒的特异性引物和荧光探针；

（2）在待测样本中加入合成的引物和探针，和逆转录酶突变体和Taq DNA聚合酶，进行逆转录反应，反应过程中检测荧光强度。

优选的，步骤（2）中在逆转录体系中还加入RNA酶抑制剂。

优选的，步骤（2）中逆转录反应体系为：