[发明专利]逆转录酶突变体及其应用

权利要求书

1.一种逆转录酶突变体，其特征在于：在SEQ ID No.1序列的基础上进行七个氨基酸位点的突变，氨基酸突变位点为：R205H、V288T、L304K、G525D、S526D、E531G和E574G。

2.权利要求1所述的逆转录酶突变体在进行逆转录反应中的应用。

3.权利要求1所述的逆转录酶突变体在提高一步法RT-qPCR扩增效率中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于其步骤包括：

（1）合成待测RNA病毒的特异性引物和荧光探针；

（2）在待测样本中加入合成的引物和探针，和权利要求1所述的逆转录酶突变体和TaqDNA聚合酶，进行逆转录反应，反应过程中检测荧光强度。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：步骤（2）中在逆转录体系中还加入RNA酶抑制剂。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：步骤（2）中逆转录反应体系为：

组分	体积：μL
2×基础Buffer	12.5
5U/μL 的Taq DNA聚合酶	0.2-0.6
10U/μL 的逆转录酶突变体	1-4
10U/μL 的RNasin Inhibitor	0.5-2
Primer/Probe mix	1
RNA模板	5
2O]]>	Up to 25μL

其中2×基础Buffer的配比为：

组分	浓度
Tris-HCL pH8.5-9.0	40-200mM
2]]>	4-16mM
KCl	100-200mM

。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：步骤（2）中逆转录反应的过程为：反应体系先在50℃保温10min，然后温度升高到95℃保温5min，再进行95℃ 15sec、60℃30sec的循环，循环数为45，循环时在60℃下采集荧光。