[发明专利]猪繁殖与呼吸障碍综合征和猪肺炎支原体二联多表位疫苗的制备

说明书

本发明提供了猪繁殖与呼吸障碍综合征和猪肺炎支原体二联多表位疫苗的制备，包括以下步骤：A、PRRSV的GP5蛋白和GP6蛋白的抗原表位；B、Mhp的P46和P65的抗原表位；C、PRRSV和Mhp抗原表位的重组；D、对重组抗原表位蛋白RP1进行亲水性等分析及二级结构分析；F、重组抗原表位蛋白RP1原核表达载体的构建；G、重组抗原表位蛋白RP1表达及验证；H、重组抗原表位蛋白RP1的纯化及验证。本发明可以同时有效预防PRRSV及Mhp感染，极大的降低了操作难度，节省了疫苗本身和人力注射的成本；能够一次注射，预防多种疾病，适用于养猪业对PRRSV及Mhp的预防，安全性高、免疫效果好。

技术领域

本发明属于疫苗制备技术领域，具体的涉及一种猪繁殖与呼吸障碍综合征和猪肺炎支原体二联多表位疫苗的制备。

背景技术

猪繁殖与呼吸障碍综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是一种典型的以母猪生殖障碍及生长猪呼吸窘迫为特征的传染性疾病，其病原体为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)，具有连续性传染及抗原变化能力，进化速度快、环境适应能力强、传播速度快，涉及范围广泛，严重制约世界养猪业的健康可持续性发展。猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumonia，Mhp)可引起猪喘气病，此病难以根治，经常季节性爆发，在猪上皮纤维细胞上黏附，破坏呼吸道的滤过功能，造成其他病原菌的继发感染，形成猪的呼吸道疾病综合征(Porcin respiratory disease complex，PRDC)。

猪群经常感染一种以上的呼吸疾病，因此二联或多联疫苗是目前疫苗研究的热点方向。然而目前设计使用的疫苗大都不是为了联合使用设计的，联合使用可能会降低疗效，目前也没有针对猪肺炎支原体和猪繁殖与呼吸障碍综合征的联合疫苗，所以急需一种能够同时预防猪肺炎支原体和猪繁殖与呼吸障碍综合征交叉感染的联合疫苗。

表位疫苗是用抗原表位制备的疫苗。抗原表位又称为抗原决定簇，根据其引起的免疫应答不同可分为B表位和T表位，同理，表位疫苗也可分为B表位疫苗和T表位疫苗以及T表位和B表位都有的多表位疫苗。

多表位疫苗既含有B表位，也含有T表位，与其他疫苗相比具有高效呈递，能够有效应对病毒分子的变异和免疫中的不利因素，诱发细胞免疫等方面的优势，T细胞免疫的过程需要主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex，MHC)分子与抗原表位紧密结合，CTL细胞表位能够与大多数MHC-II类分子结合，不加选择，克服了MHC-II的限制性，增强表位多肽的免疫原性，所以多表位疫苗能够克服MHC分子的遗传限制。

二联或多联表位疫苗既有表位疫苗本身的优势，同时又能够预防多种疾病，极大的降低了操作难度，既节省了疫苗本身的成本，也节省了人力注射的成本，能够一次注射，预防多种疾病，这也是目前疫苗研究的一个热点方向。

传统疫苗主要以灭活疫苗，弱毒疫苗为主。灭活疫苗安全可靠，无毒力返强的危险，但是灭活疫苗存在免疫效果不佳、免疫剂量多、免疫次数多的缺点；弱毒疫苗产生抗体快，免疫次数少，但是弱毒疫苗存在毒力返强的危险，易发生水平和垂直的传播，易发生重组和变异。表位疫苗利用病原体上能与糖蛋白和核蛋白复合体特异性结合的抗体结构，保留了免疫原性且无致病性，安全可靠。猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒和猪肺炎支原体是养猪业中常见的两种病原，经常交叉感染，造成巨大经济损失，虽然已有疫苗分别预防两类病原感染，但是联合使用时疫苗的保护效力会受到影响。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，本发明利用基因工程技术，制备了一种猪繁殖与呼吸障碍综合征和猪肺炎支原体二联多表位疫苗，能够同时预防猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒和猪肺炎支原体感染。

本发明采用的技术方案为∶猪繁殖与呼吸障碍综合征和猪肺炎支原体二联多表位疫苗的制备，其特征在于：包括以下步骤：