[发明专利]鉴别布鲁氏菌疫苗株A19与野毒株的引物、探针及应用

说明书

本发明公开了一种鉴别布鲁氏菌疫苗株A19与野毒株的引物、探针及应用，属于基因检测领域。所述引物包括如SEQ ID NO：1所示的上游引物和如SEQ ID NO：2所示的下游引物；所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。本发明利用所述引物和探针进行荧光检测，能够实现快速、高通量、高灵敏度、特异性区分布鲁氏菌A19(S19)疫苗株与野毒株。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，涉及一种鉴别布鲁氏菌疫苗株A19与野毒株的引物、探针及应用，特别涉及快速区分布鲁氏杆菌A19疫苗株与野毒株的引物探针、试 剂盒及应用与方法。

背景技术

布鲁氏菌病(简称布病)是由布鲁氏菌(Brucella)引起的一种人畜共患传染病。根据其致病性和宿主选择性，可将其分为至少10个种，其中以羊种布鲁氏菌(Brucellamelitensis)、牛种布鲁氏菌(Brucella abortus)和猪种布鲁氏菌(Brucella suis)的感染性最强。该菌可以感染人和牛、羊、猪等多种动物。目前，我国主要采取以预防为主的 防疫措施，国内批准生产的布鲁氏菌病活疫苗品种主要包括：牛种布鲁氏菌A19株、 猪种布鲁氏菌S2株、羊种布鲁氏菌M5株和M5-90株等。我国目前使用的A19疫苗 株是19世纪50年代从苏联引进的S19菌株。国际上现用的S19疫苗株与A19疫苗株 相比，在赤藓醇操纵子中有一段702bp的序列缺失，而对赤藓醇敏感，基因组核苷酸相 似性为99.9％，S19疫苗株与国内使用的A19疫苗株同源(Shuyi Wang,Wenlong Wang, Ke Sun,HuheBateer,XueliangZhao.Comparative genomic analysis between newly sequenced Brucellaabortus vaccine strain A19 and another Brucella abortus vaccine S19[J].Genomics, 2020,112(2)：1444-1453.)。

目前已报道的鉴别检测疫苗株A19与野毒株的方法有针对单核苷酸多态性(SNP)位点检测的MGB探针法(Gopaul K K,Sells J,Bricker B J,et al.Rapid and ReliableSingle Nucleotide Polymorphism-Based Differentiation of Brucella Live VaccineStrains from Field Strains[J].Journal of Clinical Microbiology,2010,48(4):1461-4.)和Cycling探针法(谭鹏 飞.基于PCR方法布鲁菌疫苗株与野生菌株鉴别诊断方法的建立[D].扬州大学,2012.)， 但这两种方法都需要双探针，检测分型成本较高，需要研发检测成本较低，应用价值更 广的分型检测方法。

发明内容

本发明的目的是提供鉴别布鲁氏菌疫苗株A19与野毒株的引物、探针及应用，以解决上述现有技术存在的问题，通过提供的引物对以及一条探针，实现了快速、高通量、 高灵敏度、特异性区分布鲁氏菌A19(S19)疫苗株与野毒株。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种鉴别布鲁氏菌疫苗株A19与野毒株的引物和探针，所述引物包括如SEQ ID NO：1所示的上游引物和如SEQ ID NO：2所示的下游引物；所述探针的核 苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

优选的是，所述探针核苷酸序列的5'端连接荧光基团、3'端连接淬灭基团，所述荧光基团选自FAM、HEX、VIC、CY5、TET中的任意一种；所述淬灭基团选自BHQ 系列和TAMRA系列中的任意一种。

本发明还提供一种试剂盒，包括所述的引物和探针。

本发明还提供一种所述的引物和探针、或所述的试剂盒在快速区分布鲁氏杆菌A19 疫苗株与野毒株中的应用。