[发明专利]一种芘修饰的G-四链荧光探针及其制备方法与应用

说明书

本发明公开一种芘修饰的G‑四链荧光探针及其制备方法与应用，包括还原氧化石墨烯和吸附在所述还原氧化石墨烯表面上的芘修饰的G‑四链体DNA序列。所述芘修饰的G‑四链体DNA序列吸附在所述还原氧化石墨烯的表面，使得所述芘修饰的G‑四链体DNA序列的荧光得到了淬灭，当所述G‑四链体DNA序列和凝血酶结合时，使所述芘修饰的G‑四链体DNA序列在所述还原氧化石墨烯表面吸附能力减弱，荧光增强，本发明芘修饰的G‑四链荧光探针很好地回避了背景信号的干扰。本发明方法简单、高效、选择性好、动态响应范围宽、相关仪器使用方便，是目前化学发光检测方法中灵敏度较高的检测手段，具有重要的潜在应用价值。

技术领域

本发明涉及分子探针领域，尤其涉及一种芘修饰的G-四链荧光探针及其制备方法与应用。

背景技术

癌症是导致人类死亡的一个主要原因，特发性静脉血栓的形成与隐匿性癌症有关，在血栓形成过程中产生的凝血酶可增强肿瘤细胞的恶性表型。

凝血酶能够激活肿瘤细胞与血小板，内皮细胞和内皮下基质蛋白的粘附，促进肿瘤细胞生长，增加肿瘤细胞的播种和自发转移，并刺激肿瘤细胞的血管生成。因此，检测肿瘤细胞中凝血酶的含量对于研究癌细胞的增殖过程，及癌症的诊断具有十分重要的意义。

发明内容

鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种芘修饰的G-四链荧光探针及其制备方法与应用，旨在能够检测凝血酶。

本发明的技术方案如下：

本发明的第一方面，提供一种芘修饰的G-四链荧光探针，其中，包括还原氧化石墨烯和吸附在所述还原氧化石墨烯表面上的芘修饰的G-四链体DNA序列。

可选地，所述G-四链体DNA序列的碱基序列为5'-TTT TTU₁ GGG TTA GGG TTA GGGTTA GGG-3'或5'-TTT TU₁U₁ GGG TTA GGG TTA GGG TTA GGG-3'，其中，

可选地，所述芘修饰的G-四链体DNA序列的碱基序列为5'-TTT TTU₁^*GGG TTA GGGTTA GGG TTA GGG-3'或5'-TTT T U₁^*U₁^*GGG TTA GGG TTA GGG TTA GGG-3'，其中，

本发明的第二方面，提供一种本发明所述的芘修饰的G-四链荧光探针的制备方法，其中，包括步骤：

提供尿嘧啶磷酸盐衍生物及还原氧化石墨烯；

利用所述尿嘧啶磷酸盐衍生物，通过DNA固相合成仪合成所述G-四链体DNA序列；

以所述G-四链体DNA序列为模板，通过点击(Click)反应，制备得到所述芘修饰的G-四链体DNA序列；

将所述还原氧化石墨烯与所述芘修饰的G-四链体DNA序列进行孵化，得到所述芘修饰的G-四链荧光探针。

可选地，所述尿嘧啶磷酸盐衍生物的制备步骤包括：

提供5-三炔丙基胺-2'-脱氧尿苷、4，4'-双甲氧基三苯甲基氯、2-氰乙基-N,N-二异丙基氯代亚磷酰胺；

将所述5-三炔丙基胺-2'-脱氧尿苷与所述4，4'-双甲氧基三苯甲基氯进行反应，分离纯化后得到5'-DMT-5-三炔丙基胺-2'-脱氧尿苷(其中DMT是4,4'-双甲氧基三苯甲基的简称)；

将所述5'-DMT-5-三炔丙基胺-2'-脱氧尿苷与所述2-氰乙基-N,N-二异丙基氯代亚磷酰胺进行反应，分离纯化后得到所述尿嘧啶磷酸盐衍生物。