[发明专利]一种基于行为和生化指标的抗阿尔兹海默症药物的筛选方法及用该方法筛选的药物

说明书

本发明公开了一种基于行为和生化指标的抗阿尔兹海默症药物的筛选方法及用该方法筛选的药物，筛选方法包括：构建斑马鱼幼鱼阿尔兹海默症模型，确定待筛选药物的最大安全浓度，对斑马鱼幼鱼进行实验处理，利用行为学和生化指标筛选抗阿尔兹海默症药物，判断药物是否具有抗阿尔兹海默症，本发明的基于行为和生化指标的抗阿尔兹海默症药物的筛选方法，可以系统完整的筛选抗阿尔兹海默症药物，尤其是对效力无法确定的新药物进行筛选；药物浸泡和测试环境更加简单，只需在实验孔板中进行，药物浸泡时一个孔中可药物浸泡多条鱼，测试时最多可以同时测试48条鱼的行为能力，操作过程简单，容易操作，大大减轻了测试的工作量，并且减少了测试的系统误差。

技术领域

本发明涉及药物筛选技术领域，具体说是一种基于行为和生化指标的抗阿尔兹海默症药物的筛选方法及用该方法筛选的药物。

背景技术

阿尔兹海默症是一种最常见的困扰中老年人的神经退行性疾病，记忆和认知功能障碍是该病的核心特征，临床表现为学习记忆和空间辨识能力下降、对应激刺激恢复能力下降、反应迟钝，甚至会发生人格改变进展为全面性痴呆状态。阿尔兹海默症主要的神经病理学特征为过度磷酸化的tau蛋白聚集导致细胞内神经元纤维缠结；β淀粉样蛋白异常堆积形成细胞外淀粉样蛋白斑；由于脑区异常蛋白的过量聚集，对脑部细胞产生影响甚至凋亡，形成阿尔兹海默症患者典型的神经病理学损害。另一方面，由于阿尔兹海默症作为神经退行性疾病，因此对神经保护方面起到作用的药物都有可能改善阿尔兹海默症，但是目前还没有系统全面的抗阿尔兹海默症药物的筛选方法，因此药物的有效性不能得到验证，严重影响了药物研发后效果的验证。

斑马鱼由于和人类基因同源性高，各组织器官在受精后24小时即可形成，发育周期短，个体小等优势可以作为筛选阿尔兹海默症药物的动物模型，中国专利201811135578.2一种用于药物筛选的阿尔兹海默症模型的构建方法，以斑马鱼作为模式动物，通过锌离子诱导得到阿尔兹海默症模型；但是该技术存在以下问题：

第一，该技术没有记载如何对待筛选药物(效力未定的药物)进行系统完整的筛选；

第二，随着研究的深入发现锌离子具有一定的腐蚀性，尤其对斑马鱼幼鱼的皮肤黏膜具有腐蚀性，因此用锌离子作为造模药在测定阿尔兹海默症的行为学检测时，得到的数据准确度和可靠性会受到影响；

第三，该技术中是用成年斑马鱼作为模式动物，体积长度一般是5cm左右，需要在鱼缸中喂养，饲养密度小，并且在测试时需要将每条鱼放在测试缸中单独进行测试，一次只能测试一条鱼，无法批量进行测试，并且成鱼用药量多，活动力量大，在测试过程中不易控制，因此测试过程操作繁琐，工作量庞大，对鱼缸和测试缸等饲养和测试环境也有较高的要求。

发明内容

为解决现在阿尔兹海默症药物筛选的片面、角度单一、零散并且测试过程繁琐、工作量大，不能批量测试的问题，本发明的目的是提供一种基于行为和生化指标的抗阿尔兹海默症药物的筛选方法及用该方法筛选的药物，能够对抗阿尔兹海默症药物进行全面、高效率、准确的筛选。

本发明为实现上述目的，通过以下技术方案实现：

一种基于行为和生化指标的抗阿尔兹海默症药物的筛选方法，包括以下步骤：

⑴构建斑马鱼幼鱼阿尔兹海默症模型

以3日龄的斑马鱼幼鱼作为模式动物，通过80μM浓度的AlCl₃溶液诱导，建立斑马鱼幼鱼阿尔兹海默症模型；

⑵确定待筛选药物对3日龄斑马鱼幼鱼的最大安全浓度

⑶对斑马鱼幼鱼进行实验处理