[发明专利]一种抗人PLA2R抗体标准品的制备方法

说明书

本发明涉及一种生物工程领域，特别是涉及一种抗人PLA2R抗体标准品的制备方法。本发明的亲和(嵌合)人‑小鼠抗体替代的方法，不仅仅简单制备，来源可靠，而且具有很高的稳定性，尤其是避免了采用患者血清的潜在伦理问题和生物安全性问题。

技术领域

本发明涉及一种生物工程领域，特别是涉及一种抗人PLA2R抗体标准品的制备方法。

背景技术

膜性肾病(Membranous Nephropathy，MN)是成人肾病综合征(NephroticSyndrome，NS)最常见的病理类型，为我国原发性肾小球疾病的第二大病因，其中70％膜性肾病患者表现为持续反复的蛋白尿，从而导致肾脏损伤，甚至危及生命。膜性肾病可分为特发性膜性肾病(Idiopathic Membranous Nephropathy，IMN)和继发性膜性肾病(SecondaryMembranous Nephropathy，SMN)，其中IMN患者约占70％～80％，SMN患者约占20％～30％。其中75％～85％的IMN患者有肾病程度的蛋白尿，约40％～60％的IMN患者会在5～20年内发展为终末期肾衰竭。传统的IMN临床诊断方法为肾脏穿刺进行肾组织病理学检查，包括光镜、荧光和电镜，这是一种侵入式的检测方法，不仅需要有较高的技术要求，还对患者有一定的损伤。

目前已经证实PLA2R受体，即磷脂酶A2受体，是自身抗体的主要靶抗原，研究发现75％的IMN患者血清中抗PLA2R受体抗体为阳性，而在继发性膜性肾病患者极少表现为阳性，其他类型肾小球疾病患者、健康人群均为阴性。因此，临床中迫切需要研制一种无创伤、低风险、操作方便、灵敏度高的PLA2R定量检测方法。

在现有相关试剂盒中，抗人PLA2R抗体的检测标准品均采用经检定的PLA2R抗体阳性的病人混合血清或制备的抗体，这个方法不仅仅制备繁琐，来源有限，而且缺乏稳定性，尤其是经常涉及伦理学和生物安全性的问题。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种亲和(嵌合)人-小鼠抗体替代的方法，不仅仅简单制备，来源可靠，而且具有很高的稳定性，尤其是避免了采用患者血清的潜在伦理问题和生物安全性问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明的第一方面提供了一种免疫抗原蛋白，用于免疫机体产生针对PLA2R的抗体。

一种实施方式中，所述免疫抗原蛋白为PLA2R受体的胞外区序列。

一种实施方式中，所述免疫抗原蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.1或其保守型变异序列。

本发明的第二方面，提供一种针对PLA2R的抗体，为以上述免疫抗原蛋白为抗原制得。

进一步地，所述针对PLA2R的抗体能够特异性结合PLA2R受体的胞外抗原结合区。所述PLA2R的胞外抗原结合区含有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸片段。

一种实施方式中，所述针对PLA2R的抗体为单克隆抗体。

进一步地，所述单克隆抗体选自抗PLA2R单抗6G2或抗PLA2R单抗3C12。

所述抗PLA2R单抗6G2包括重链和轻链，所述重链包括互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ IDNO.13所示，HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示；所述轻链包括互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示，所述LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.16所示，所述LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.17所示。