[发明专利]人外周血T淋巴细胞的处理方法及免疫原制剂和应用

说明书

本发明涉及一种人外周血T淋巴细胞处理方法及免疫原制剂、抗血清的制备和应用，具体利用废弃的白细胞滤盘分离纯化T淋巴细胞，并进行增殖培养，对分离后的T淋巴细胞和培养后的T淋巴细胞进行抗原表面标志鉴定比较及活性比较；再将扩增培养后的高活性T淋巴细胞作为免疫原，用健康猪进行抗血清的制备，用E玫瑰花环抑制实验和细胞毒实验结果评价免疫后的效价，制定免疫程序，即可大量制备抗血清；再采集抗血浆进行血浆的分离，用于ALG产品的制备。本发明可以解决抗人T淋巴细胞免疫球蛋白制备原料效价检定、成品效价检定中每次需要采集新鲜全血的限制问题，同时还能够解决抗人T淋巴细胞免疫球蛋白原料瓶颈的问题。

技术领域

本发明涉及血液制品技术领域，尤其涉及一种人外周血T淋巴细胞的处理方法及免疫原制剂、抗血清的制备和应用。

背景技术

抗人淋巴细胞免疫球蛋白（ALG）的适应症为主要用于临床器官移植的免疫排斥预防及治疗、骨髓移植的移植物抗宿主反应预防以及再生障碍性贫血等病的治疗。

抗人淋巴细胞免疫球蛋白产品常规采用人体胸腺淋巴细胞作为免疫原，免疫猪后得到抗人淋巴细胞免疫蛋白制品的原料血清，再经提纯、精制等获得猪抗人淋巴细胞免疫球蛋白制剂。

但是，人体胸腺淋巴细胞作为原料获取难度大，效价检定的规范性问题较差。另外，常规采用胸腺细胞作为抗原时，抗原成分比较复杂，免疫过程中会产生红细胞抗体、胸腺组织抗体以及血小板抗体等杂抗体，使得后续ALG产品的生产纯化工艺复杂。

发明内容

基于此，有必要提供一种人外周血T淋巴细胞的处理方法及免疫原制剂、抗血清的制备和应用。

本发明的技术方案如下：

概括地讲，本发明的技术构思在于利用废弃的白细胞滤盘，将T淋巴细胞从中分离纯化和增殖培养，对分离后的T淋巴细胞和培养后的T淋巴细胞进行抗原表面标志鉴定比较及活性比较；再将扩增培养后的高活性T淋巴细胞作为免疫原，免疫健康的猪，进行抗血清制备，用E玫瑰花环抑制实验和细胞毒实验结果评价免疫后的效价，制定免疫程序，即可大量制备抗血清；再采集抗血浆进行血浆的分离，用于ALG产品的制备。

具体地，本发明提供一种人外周血T淋巴细胞处理方法，包括如下步骤：收集白细胞滤盘中的白细胞，采用淋巴细胞分离液处理所述白细胞，获得分离纯化的单核细胞；对分离纯化的单核细胞进行活性鉴定，主要表面抗原分子进行鉴定和细胞计数。将所述分离纯化的单核细胞进行增殖培养，获得高活性T淋巴细胞（活性大于90%）。

本发明人外周血T淋巴细胞处理方法还包括细胞冻存的步骤：收集经表面抗原分子鉴定和细胞计数后的单核细胞，进行批量冻存，获得效价检定用细胞，用于解决每次检定需要采集新鲜全血的限制问题，可以解决效价检定用细胞的规范性问题。

本发明还提供一种T淋巴细胞免疫原制剂，主要由矿物油佐剂、分子佐剂和高活性T淋巴细胞经混合制备而成的水包油抗原制剂。优选地，所述矿物油佐剂优选自四川依思康RM502组分A或RM503组分A，分子佐剂优选自RM502组分B或RM503组分B。

本发明还提供一种T淋巴细胞免疫原制剂的制备方法，包括如下步骤：将所述高活性T淋巴细胞作为抗原，无菌条件下将抗原和矿物油佐剂按照质量比1:1混匀，再加入分子佐剂，震荡形成水包油抗原制剂。

本发明还提供一种含抗人淋巴细胞免疫蛋白的抗血清的生产方法，包括如下步骤：采用所述免疫原制剂颈侧肌注免疫健康猪，免疫程序为1次基础免疫和2次加强免疫，免疫时间间隔为21~28天，于第2次加强免疫后的第9~14天收集含抗人T细胞免疫蛋白的抗血浆，即得。优选地，还包括对所述抗血浆进行抗体效价分析的步骤。

本发明还提供一种抗人淋巴细胞免疫蛋白的生产方法，以白细胞滤盘收集的白细胞为原料，利用增殖培养的高活性T淋巴细胞免疫动物，生产获得的抗血清，分离，纯化，精制获得抗人淋巴细胞免疫蛋白。

本发明的有益效果是：