[发明专利]R406在促进体细胞重编程中的应用、其重编程培养基及方法

权利要求书

1.一种R406在体外促进体细胞重编程为多能干细胞中的应用，其中，R406的分子式为

。

2.根据权利要求1所述一种R406在体外促进体细胞重编程为多能干细胞中的应用，其特征在于，所述体细胞为小鼠胚胎成纤维细胞。

3.一种重编程培养基促进体细胞重编程为多能干细胞中的应用，其特征在于，所述重编程培养基由基础培养基中添加SYK抑制剂R406制成。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述重编程培养基中R406的浓度为1μM。

5. 根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于，所述基础培养基包括78% DMEM，10%KSR，10% FBS，1% NEAA，1% P/S，0.055 mM β-ME，20 ng/mL bFGF，0.5 mM VPA，20 μMCHIR99021，10 μM 616452，5 μM Parnate，50 μM Forskolin，0.5 μM AM580，5 μMEPZ004777和250 μM vitamin C。

6. 根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于，所述基础培养基包括78% DMEM，10%KSR，10% FBS，1% NEAA，1% P/S，0.055 mM β-ME和1,000 U/mL mLIF，2 µg/mL 强力霉素。

7.一种利用重编程培养基促进体细胞重编程为多能干细胞的方法，其特征在于，步骤具体如下：

1）在MEF培养基中接种待重编程的体细胞；

2）在MEF培养基中培养体细胞1天后，将MEF培养基更换为根据权利要求5所述的重编程培养基；

3）每4天更换一次新的所述重编程培养基，连续培养12天；

4）在体细胞培养重编程的第12天，将所述重编程培养基更换为Stage 2培养基；

5）每4天更换一次新的所述Stage 2培养基，连续培养12天；

6）在体细胞培养重编程的第24天，将所述Stage 2培养更换为Stage 3培养基；

7）每4天更换一次新的所述Stage 3培养基，连续培养12~16天，完成体细胞的重编程培养过程。

8. 根据权利要求7所述一种利用重编程培养基促进体细胞重编程为多能干细胞的方法，其特征在于，所述Stage 2培养基包含78% DMEM，10% KSR，10% FBS，1% NEAA，1% P/S，0.055 mM β-ME，20 ng/mL bFGF，0.5 mM VPA，10 μM CHIR99021，10 μM 616452，5 μMParnate，10 μM Forskolin，0.5 μM AM580，0.05 μM DZNep，0.5 μM 5-aza-dC，5 μMSGC0946和250 μM Vc。

9. 根据权利要求7所述一种利用重编程培养基促进体细胞重编程为多能干细胞的方法，其特征在于，所述Stage 3培养基包括47% DMEM/F12，47% Neurobasal 培养基，1× N2supplement，1× B27 supplement，1% NEAA，1% P/S，0.055 mM β-ME，1,000 U/mL LIF，3 µM CHIR99021和0.2 µM PD0325901。

10.一种利用重编程培养基促进体细胞重编程为多能干细胞的方法，其特征在于，步骤具体如下：

1）将待重编程的体细胞进行慢病毒转染，所述慢病毒表达Oct4，Sox2，Klf4和c-Myc基因；

2）将转染后的体细胞传代培养；

3）将传代培养后的体细胞置于根据权利要求6所述的重编程培养基中，每4天更换一次新的所述重编程培养基，连续培养8天，完成体细胞的重编程培养过程。