[发明专利]一种分离αs

说明书

本发明公开了一种分离α_s1‑酪蛋白的方法，属于蛋白分离技术领域。本发明以生牛乳、含有牛乳的物质、牛乳酪蛋白、山羊乳、含有山羊乳的物质、羊乳酪蛋白为原料，通过脱脂—盐酸沉淀—尿素沉淀—透析—钙离子沉淀，得到纯度为90％以上的α_s1‑酪蛋白。本方法也可用于牛乳粉中α_s1‑酪蛋白的分离，简单易重复，不需要特殊仪器即可完成。得到的α_s1‑酪蛋白无毒无害，可直接用于后续生产或实验。

技术领域

本发明涉及一种分离α_s1-酪蛋白的方法，属于蛋白分离技术领域。

背景技术

酪蛋白是动物乳中重要的成分之一，占乳蛋白总量的80％左右，包括α_s1-酪蛋白、α_s2-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白四种蛋白质，分子量大小在19至25.2kDa之间，在牛奶中以胶束的状态存在，携带大量的钙和磷酸盐，并能提供丰富的氨基酸。其中α_s1-酪蛋白是牛奶酪蛋白中含量最高的一类(总酪蛋白的38％～40％)，它是一种高度磷酸化的蛋白，含有8～9个磷酸化基团。在经过水解后，得到与钙结合的可溶性磷酸肽，可促进钙的吸收，是牛乳活性肽的重要来源。与牛奶相比，羊乳中α_s1-酪蛋白占酪蛋白总量的5.6％，含量极少，加之α_s1-酪蛋白是最重要的高磷酸化蛋白之一，提取更加困难。

近几年来，随着乳品科技研究的日益深入，乳蛋白组分的分离纯化技术也提出了更高的要求。现阶段乳蛋白分离主要用到三种方法：等电点及盐析法、膜分离技术以及色谱分离法。等电点及盐析法主要是通过乳蛋白中不同组分等电点不同以及在不同盐浓度中的溶解度不同来实现分离的，其优点是操作简单，不需要复杂的设备，但纯度较低；膜分离技术可通过控制不同的孔径截留蛋白实现分离，其优点是操作条件温和，不会破坏蛋白原有的性质，但目前仅能实现酪蛋白或β-酪蛋白的分离；色谱法主要利用不同乳蛋白对各种离子的亲和力不同，通过离子交换色谱或高效液相色谱，来实现乳蛋白的分离，其优点使分辨率高，重复性好，纯度高，缺点是需要特定的设备，且效率较低。

目前公开的方法中，主要还是以制备得到α_s-酪蛋白为主：徐明芳等人公开了一种离子交换色谱分离乳源α_s-酪蛋白，该方法以酪蛋白为原料，配制成4mg/mL的溶液，上DEAE-Sepharose CL-6B色谱柱后洗脱，得到100％纯度的α_s-酪蛋白(公开号：CN 102746394A，公开于2012年10月24日)。张列兵等人公开了一种采用化学分级分离法纯化分离α_s-酪蛋白；该方法以牛乳酪蛋白为原料，配制成2.7％的水溶液，通过40mMCa²⁺沉淀分离κ-酪蛋白，再通过α_s-酪蛋白与β-酪蛋白在尿素溶液中溶解度不同分离α_s-酪蛋白。得到纯度为96.2％的α_s-酪蛋白(公开号：CN 101824085 A，公开于2010年9月8日)。李全阳等人公开了一种分离水牛奶中酪蛋白组分的方法；该方法以水牛奶为原料，采用等电点酸沉酪蛋白，再通过不同浓度的Ca²⁺离子分离α_s-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白，得到纯度为91.6％的α_s-酪蛋白(公开号：CN 102675448 A，公开于2012年9月19日)。

但是现有技术都还局限于α_s-酪蛋白的提取，还没有真正的用于α_s1-酪蛋白的分离纯化技术，局限了对于α_s1-酪蛋白的开发与应用。

发明内容

针对目前牛乳或羊乳中α_s1-酪蛋白分离纯化方法较少，本发明提供一种通过等电点及盐析法分离纯化生牛乳或羊乳中α_s1-酪蛋白的方法。本方法以生牛乳为原料，经过酸沉，尿素分离，透析，Ca²⁺沉淀后得到较高纯度的α_s1-酪蛋白。